Tinción de bacterias

Question 1

Pasos para realizar una tinción de Gram

Answer 1

Compuesta y diferencial.
1. Preparar el frotis. Medio sólido se pone un gota de agua destilada y una colonia con ansa estñeril; si es medio líquido se ponen 1 gota del medio de cultivo y extender en el porta.
2. Secado - al aire o a 15 cm o + de la llama del mechero.
3. Fijado - se pasa el porta tres veces por la llama, se mueren las bacterias y se preservan las estructuras.
4. Coloración
4a. Cristal violeta - 1 min, las deja a todas las bacterias violetas
4b. Lugol - 1 min, tiene yodo que forma un complejo con el cristal violeta
4c. Decolorar con alcohol - acetona por 15 - 30 seg. se decoloran las Gram -
4d. Safranina - 1 minuto, quedan las bacterias antes decoloradas de color rosado
5. Se observa al microscopio a 100z con una gota de acceite de inmersión.
Luego de cada paso es necesario lavar con agua.

Question 2

En qué situación podemos hacer un frotis directo?

Answer 2

En hisopado de oído para descartor Malassezia (levadura), igualmente antes se debe sembrar en placa. Se hace tinción de Gram.

Question 3

Cómo se colorean las epsoras?

Answer 3

Tinción de Schaeffer Fulton.
Se tiñe con calor (modifica la permeabilidad de la endospora y permite la entrada del colorante a través de las capas).
Se pone colorante verde malaquita (soluble en agua)
Lavar con agua (decolora las formas vegetativas)
Se tiñe con colorante de contraste Safranina, tiñe los extremos de las bacterias esporuladas.

Question 4

Cómo se colorean las esporas?

Answer 4

Se hace una tinción de Schaeffer Fulton.
1. Cubrir con unas gotas de verde malaquita y aplicar calor con un hisopo de lana de vidrio, mantener 5 minutos desde el comienzo de la emisión de vapores.
2. Lavar el exceso de colorante con agua.
3. Cubrir con el colorante de contraste, safranina durante 1 minuto
4. Lavar el exceso de colorante con agua.
5. Dejar secar al aire.
5. Añadir una gota de aceite de inmersión y observar al microscópio 100X

Se observa la presencia y posición de las esporas - terminales, centrales e intermedias.

Question 5

Cómo se hace la coloración de la cápsula?

Answer 5

1. Preparación del frotis - Impronta (órgano)
2. Secado del frotis
3. Fijación química:
   alcohol metílico (NO calor)
4. Teñir con azul de metileno
   de Loeffler por 2 o 3 minutos
5. Lavar y secar
6. Se observa a 100x con aceite de inmersión