Técnicas serológicas aplicadas a la microbiología Flashcards
Qué son las técnicas inmunodiagnósticas?
Las técnicas inmunodiagnósticas sirven para identificar al antígeno o al anticuerpo en muestras de animales sospechosos de estar o haber padecido una enfermedad. Se busca a la partícula viral, proteínas o anticuerpo. Las técnicas inmunodiagnósticas se basan en la interacción específica entre antígeno - anticuerpo.
Cuáles son los usos de las técnicas serológicas?
Diagnóstico de enfermedades, exigencia sanitaria y evaluación de vacuna.
Qué son las técnicas de unión primaria? Ejemplos
Técnicas inmunodiagnósticas donde se ve directamente la unión del antígeno anticuerpo.
Ej. ELISA, IC, IFI.
Qué son las técnicas de unión secundaria? Ejemplos
Es cuando vemos el resultado de la unión antígeno anticuerpo. Es importante el concepto de zona de equilibrio o equivalencia, donde no debe haber una concentración baja o excesiva de antígenos o anticuerpos.
Ej. Precipitación y aglutinación
De qué formas podemos detectar el complejo antígeno anticuerpo?
- Inmunomarcados - Se unen los anticuerpos a determinadas moléculas (enzimas, fluoróforos, isotopos radioactivos, metales pesados), lo que nos permite evidenciar la presencia de ese anticuerpo sobre un antígeno.
- Aglutinación - Los anticuerpos ante la presencia de antígenos particulados, pueden unirse formando una malla de aglutinación.
- Precipitación - los anticuerpos al enfrentarse con antígenos solubles tienen la capacidad de unirse formando un precipitado visible.
- Neutralización - si neutralizamos a los virus, impedimos que pueda producir su efecto sobre un animal o un cultivo de células. Se asemeja a los sistemas vivos.
En qué se basa la técnica ELISA?
La técnica de ELISA se basa en la detección de anticuerpos en suero (IgM, IgG) o en secreciones
(IgA) o antígenos en diferentes muestras (secreciones, sangre, LCR).
La presencia de anticuerpos o antígenos en la muestra es detectada por el conjugado y esa detección
es evidenciada al agregar el sustrato generando un cambio en el mismo generalmente colorimétrico
que se evalúa mediante un espectrofotómetro. El conjugado es un anticuerpo unido a una enzima.
Tipos de ELISA
ELISA directo - se busca antígeno en una muestra.
ELISA sandwich - busca antígeno en muestra, anticuerpo en placa.
ELISA indirecto - se buscan anticuerpos en una muestra. A mayor color, mayor cantidad de anticuerpos en la muestra.
ELISA de competición - para cuantificar la afinidad de los anticuerpos o antígenos. Si es positivo no hay color.
Ventajas del ELISA
Técnica de alta especificidad y sensibilidad.
Kits comerciales
Permite procesar muchas muestras a la vez
Rápida
Cuantitativas
Pasos del ELISA indirecto
- Sensibilización de la placa con antígeno
- Bloqueo - se bloquean los espacios donde no se pegó el antígeno, se usa un suero de una especie distinta a la que estamos trabajando.
- Incubación del suero
- colocación de conjugado
- se coloca el sustrato para la enzima
- colocación de solución de frenado - se frena la reacción, desnaturaliza la enzima y estabiliza el color
- lectura en espectrofotómetro
Entre cada paso se hace un lavado (hasta el frenado) para sacar el exceso de lo que no se pegó.
Pasos del ELISA sándwich
- sensibilización de la placa con anticuerpos
- Bloqueo
- Incubación de la muestra problema
- Incubación del anticuerpo primario (IgG anti - virus)
- Incubación con el conjugado anti G
- Sustrato para la enzima
- frenado
- lectura en espectrofotómetro
Cuál es la base de la técnica de inmunofluorescencia
Es la utilización de un anticuerpo conjugado con un fluoroforo. Puede directa (tejidos) o indirecta (suero).
Cada fluoroforo tiene un espectro de emisión y excitación característico, se precisa un microscopio de luz UV.
En qué se basa la técnica de inmunocromatografía?
Utiliza anticuerpos conjugado con metales pesados (selenio u oro). El anticuerpo/antigeno fluye por capilaridad sobre una tira porosa y reacciona con el conjugado.
En qué se basa la hemaglutinación?
La cuantificación se basa en la realización de diluciones seriadas en base 2, que son enfrentadas a una concentración conocida de eritrocitos. Las muestras positivas forman una malla de aglutinación, mientras que las negativas se ven como un botón por la sedimentación de los eritrocitos.
En qué se basa la técnica de inhibición de la HA?
Para sirve para la identificación del virus. Si neutralizamos previamente estos virus con anticuerpos específicos y luego los enfrentamos a eritrocitos no se producirá la aglutinación.
Que tipo de técnica es el Rosa de Bengala? Para que se usa?
Es una técnica de aglutinación que se usa para el diagnóstico de Brucelosis bovina (Brucella abortus).
