Aislamiento y titulación viral Flashcards
Para qué se usa el aislamiento viral?
Diagnóstico viral (directo), investigación y fabricación de vacunas
Qué se precisa para que el aislamiento viral exitoso?
- muestra apropiada y sustrato óptimo.
*preservación de la muestra tanto en el transporte como en el laboratorio. Ej. Cajas témicas, recipientes estériles herméticos y mantenidos a temperaturas bajas. - cuanto menor sea el tiempo entre la toma de la muestra e inoculación mayor será la probabilidad de éxito.
- evitar contaminantes.
Cuándo tomar una muestra?
El momento ideal para tomar una muestra es cuando hay signos clínicos presentes, que es el pico de replicación viral.
Que muestras se pueden tomar?
Fluidos corporales, tejidos afectados, hisopados y/o raspajes de los tejidos asociados a los signos clínicos,
Cómo debe ser enviada la muestra?
La muestra debe ser rotulada, historia clínica y datos patológicos.
Recipientes estériles y herméticos a bajas temperaturas, enviada en cajas térmicas.
Posibles medios de transporte para la muestra
- PBS (suero fisiológico) + suero fetal bovino + antibióticos + antimicóticos
- MEM + suero fetal bovino + atb + am
- PBS + antibióticos + antimicóticos + glicerina
Procesamiento de la muestra
Macerado - tejidos
Centrifugado - secreciones, el virus queda en el sobrenadante.
Dilución - heces
Filtración - heces
Qué tipos de sistemas biológicos se usan para el aislamiento viral?
- huevos embrionados
- animales de experimentación
- cultivo celular
Procedimiento para obtener el cultivo celular
Partimos de un tejido y hacemos un aislamiento de las células (mediante fragmentación mecánica o por enzimas proteolíticas).
Ej de enzimas proteolíticas - Tripsina, separa las células.
Se siembra en botellas o placas (el soporte). Las células adherentes se pegan a una superficie sólida y crecen en monocapa. Las adherentes son fibroblastos y epiteliales. Las células de suspensión no se pegan sino que flotan en el medio, son las células sanguíneas.
Se pueden congelar (lleva suero bovino fetal y DMSO) y guardar líneas celulares en un banco de células.
Tipos de cultivos celulares
*Cultivos primarios - cultivo de células tomadas directamente de un organismo y puestos a vivir en un medio artificial
* Cepas celulares - pueden derivar de un cultivo primario por selección o clonado de células con propiedades específicas. Permite mayores pasajes que los cultivos primarios.
* Líneas celulares establecidas - linea que se puede subcultivar todo el tiempo y nunca muere. Sufrieron un proceso de transformación (se malignizan y crecen indefinidamente)
Ventajas y desventajas de los cultivos celulares
Ventajas - más fácil de conservar, más barato, no utiliza animales, homogeneidad y caracterización
Desventajas - se pierde la estructura tridimensional del tejido, pérdida del sistema de regulación homeostático
Qué es el efecto citopático?
Es la evidencia de la multiplicación viral en un cultivo celular, son los cambios que se ven en las células.
