Recuento bacteriano Flashcards
Para qué se usa el recuento bacteriano?
Se usa en el laboratorio para ver la velocidad de crecimiento de una bacteria, también cuando se hace análisis de acción de antimicrobiano.
Cuáles son los métodos de recuento bacteriano?
+ Recuento microscópico directo
+ Recuento en placa
+ Recuento por filtración en membrana
+ Número más probable
Ventajas y desventajas del recuento microscópico directo
+ Es rápido
+ Es subjetivo ya que depende del ojo y la habilidad.
+ Es engorroso
+ Se usan cámaras de Neubauer.
+ No distingue vivas de muertas
+ Las bacterias muy pequeñas no se ven.
+ No sirve para muestras de baja carga celular.
+ Te podés confudir con materiales de cultivo
Cómo se hace el recuento en microspio directo?
Hay 5 zonas de conteo, elegís 2 y contás. Luego de contar se utiliza una fórmula para estimar el número total de bacterias.
Qué fórmula se utiliza para estimar el numero total de bacterias cuando se hace un recuento en microscopio?
Concentración (cel/ml) = (numero de células x 10.000)/numero de cuadrados contabilizados.
Generalidades de recuento en placa
+ Es uno de los métodos que más se utiliza.
+ Se usa para determinar el numero de bacterias en alimentos, medicamentos, agua y vacunas.
+ Se basa en que cada una de las bacterias desarrolla un colonia visible, la colonia se toma como una unidad formadora de colonia (ufc).
+ Se expresa en ufc/g o ufc/ml.
Tipos de recuento en placa
+ Recuento en superficie - siembro la muestra directamente en el medio y se incuba. Admite muestras de hasta 0,5ml.
+ Recuento incorporado - se siembra la muestra en la placa de petri y se agrega el medio (que está liquido) y se deja solidificar. Se usa para poner mayor cantidad de muestra (hasta 1ml).
Cómo se realiza el recuento en placa?
Para ambos recuentos hay que hacer diluciones seriadas en base 10. Hay que diluir la muestra para bajar la carga y poder visualizar las colonias.
Para la dilución se hacen 9 partes de diluyente (agua destilada o suero fisiológico) y 1 parte de la muestra. El total son 10ml. Pueden quedar diluciones de 1:10, 1:100, 1:1000,1:10000…
Se siembra 0,1ml de la dilución en 2 a 5 placas con Agar nutritivo y TSA.
Incubar durante 24 - 48hs.
Se cuentan las colonias de las placas que tengan entre 30 y 300 colonias y se hace un promedio. Se usa una fórmula para estimar las ufc por ml.
Cuál es la fórmula que se usa para estimar las ufc en el recuento en placa?
Ufc/ml de muestra = (numero de colonias cotadas x factor de dilución)/ ml de muestra sembrada
Qué es un petrifilm?
Sistema de recuento microbiologico, listo para usar.
Sirve para ahorrar espacio y tiene una cuadricula que ayuda a mejorar la exactitud de los recuentos.
Cómo es el recuento por filtración en membrana?
Se usa para el recuento de volumenes grandes (sea de agua, refrescos, etc.)
Se pasa un volumen de muestra a través de un filtro capaz de retener las bacterias.
El filtro se coloca sobre un medio de cultivo sólido y se incuba.
Luego se cuentan las colonias.
En qué se basa el recuento por número más probable?
No se basa en la presencia de colonias, sino que se basa en que una célula via puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.
Cómo se realiza el recuento por número más probable?
Se realizan diluciones seriadas en base 10 y se eligen 3 tubos (diluciones) y de cada tubo se siembra 1ml en 5 tubos con caldo (TSB).
Se incuba y se ve la cantidad de tubos turbios, te fijas el numero en la tabla y haces el calculo.
