Técnicas de biología molecular

Question 1

Sirve para diagnósticos de bacterias o virus

Answer 1

PCR en tiempo final

Question 2

Proceso de PCR en tiempo final

Answer 2

Proceso de termociclado, se toman fragmentos de 200 pb para que se vea.
Con temperatura elevada (94) se separa, baja temperatura se unen primers (72°), baja temperatura y se une polimerasa, termina ciclo y todo de nuevo

Question 2

dNTPs

Answer 2

Nucleótidos de óxidos para que la polimerasa arme el ADN, se encuentran libres en la prueba PCR

Question 3

Enzima taqpolim

Answer 3

Taq polimerasa, aguanta la temperatura para que funcione

Question 4

Ciclos en PCR de termociclado

Answer 4

Normalmente 40 ciclos.
Entre más energía libre de gibbs es la probabilidad de que sí se amplifiquen

Question 5

Después de PCR qué haces

Answer 5

Electroforesis, tiene que ser del tamaño que diseñaste, se utilizan marcadores de peso molecular para saber

Question 6

Bromuro de etidio

Answer 6

Carcinogénico, se une intercalado en el DNA, es lo que brilla

Question 7

RFLP

Answer 7

Fragmentos de restricción de longitud polimórfica

Question 8

Cómo funciona la RFLP

Answer 8

Enzimas de restricción que cortan el ADN, cortan secciones palindrómicas
Eco: ecoli
R: rest
1: 1°

Pones la sección en donde está la mutación, si no está sólo una línea, si está 2, si tienes una y una 3

Question 9

Prueba para anemia falciforme

Answer 9

RFLP:
mutación específica, glu por val

Question 10

RFLP con 3 alelos

Answer 10

Te ayuda a determinar el genotipo que tienes
Puede ser 1/1, 1/2, 1/3, 2/2, 2/3, 3/3

Question 11

Prueba para diagnóstico de Huntington

Answer 11

RFLP
Con cada replicación aumenta el número de repeticiones, va a ser más pesada la cadena.

Normal: 18 repeticiones
Mutante: 48 repeticiones

Question 12

Microsatélites

Answer 12

DNA satélite no codifica pero es útil para identificar

Question 13

Para qué sirven los microsatélites

Answer 13

Determinar quién se quedó con qué parte del DNA

Question 14

DNA fingerprinting

Answer 14

Se usan microsatélites del DNA que quieres comparar con otros DNAs sospechosos.
Ej: papá o asesino

Question 15

Southern Blot

Answer 15

Lee DNA, ayuda a detectar mutaciones en caso de que no haya un sitio específico de corte para la mutación

Question 16

Proceso de southern blot

Answer 16

Se pone el DNA con enzimas de restricción (endonucleasa), se hacen fragmentos, se electroforisa, se pone en un gel y se pasa a un papel de nitrocelulosa, se lava y se pone con un isótopo radioactivo con DNA complementario al gen de interés, se toma una placa y se obtiene el resultado

Question 17

rt PCR

Answer 17

Semicuantitativo: te mide pixeles, dice si hay más pero no cuánto más

Ayuda a medir niveles de RNA por la transcriptasa reversa

Question 18

qPCR

Answer 18

Cuantitativa

BHQ: quita luz
R: brilla

Question 19

Proceso de qPCR

Answer 19

Se toman los datos del amplification plot, se convierte en curva estándar de cantidad, y se hace una melt curve, después se toma la expresión de cada gen, se cuenta y se obtiene el resultado

Question 20

Prueva COVID PCR qué PCR es

Answer 20

PCR cuantitativa
qPCR

Question 21

Northen blot

Answer 21

Ve RNA, detecta expresión del gen, es semicuantitativo

Question 22

Proceso Northen blot

Answer 22

Se mete el RNA, electroforesis, se pasa a un filtro y se pone un isótopo radioactivo, se pasa el filtro y se toma una placa

Question 23

Control del northen blot

Answer 23

Expresión de actina, para que veas que fue igual en todos

Question 24

Microarreglos

Answer 24

Se ponen arreglos en una placa de pozos y se ponen muestras de dos RNA, se hace transcripción reversa y se compara el DNA generado por los dos
Puede ser de dos RNA separados o un RNA pero en distinto tiempo

Question 25

Western blot

Answer 25

Detecta proteínas, tamaño en kDa (kilodaltons), es de lo más usado en el mundo.
Las proteínas pueden ser+,-,o

Gel : poliacrilamida, bisacrilamida, son neurotóxicos
Tinción: azul de coomasie

Semicuantitativo

Question 26

Proceso western blot

Answer 26

Se ponen las proteínas, se pasan a un filtro, se exponen a anticuerpos (1° se une, 2° peroxidasa de rábano),
Luminol funciona hasta que actúa la peroxidasa, es lo que se ve en la foto gris

Lo rosa: rojo de Punzau

Question 27

Se usa mucho en VIH

Answer 27

Western Blot

Question 28

Electroforesis en segunda dimensión

Answer 28

Se tiñen con plata, dependiendo del pH y pK, las proteínas se quedan en un momento de la hoja, por lo que se pueden separar proteínas específicas

Question 29

ELISA

Answer 29

Semicuantitativa: puede ser directa, indirecta o sándwich

En la directa no se puede usar suero del paciente

Se hace en tripletes

Question 30

Dot blot

Answer 30

Elisa + western blot

Question 31

Proceso dot blot

Answer 31

Se pone la proteína, se une a membrana, se meten anticuerpos, se da un color
Es semicuantitativa

Question 32

Secuenciación

Answer 32

Se compara DNA de base/referencia con un DNA de una persona para detectar mutaciones

Question 33

Proceso de secuenciación

Answer 33

Fragmentación de DNA, se hace PCR, cada nucleótido da una señal, se hace un electroforograma
Es más específica pero más cara