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8. Técnicas de biología molecular Flashcards

1
Q

Sirve para diagnósticos de bacterias o virus

A

PCR en tiempo final

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Q

Proceso de PCR en tiempo final

A

Proceso de termociclado, se toman fragmentos de 200 pb para que se vea.
Con temperatura elevada (94) se separa, baja temperatura se unen primers (72°), baja temperatura y se une polimerasa, termina ciclo y todo de nuevo

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3
Q

dNTPs

A

Nucleótidos de óxidos para que la polimerasa arme el ADN, se encuentran libres en la prueba PCR

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4
Q

Enzima taqpolim

A

Taq polimerasa, aguanta la temperatura para que funcione

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5
Q

Ciclos en PCR de termociclado

A

Normalmente 40 ciclos.
Entre más energía libre de gibbs es la probabilidad de que sí se amplifiquen

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6
Q

Después de PCR qué haces

A

Electroforesis, tiene que ser del tamaño que diseñaste, se utilizan marcadores de peso molecular para saber

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7
Q

Bromuro de etidio

A

Carcinogénico, se une intercalado en el DNA, es lo que brilla

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8
Q

RFLP

A

Fragmentos de restricción de longitud polimórfica

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9
Q

Cómo funciona la RFLP

A

Enzimas de restricción que cortan el ADN, cortan secciones palindrómicas
Eco: ecoli
R: rest
1: 1°

Pones la sección en donde está la mutación, si no está sólo una línea, si está 2, si tienes una y una 3

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10
Q

Prueba para anemia falciforme

A

RFLP:
mutación específica, glu por val

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11
Q

RFLP con 3 alelos

A

Te ayuda a determinar el genotipo que tienes
Puede ser 1/1, 1/2, 1/3, 2/2, 2/3, 3/3

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12
Q

Prueba para diagnóstico de Huntington

A

RFLP
Con cada replicación aumenta el número de repeticiones, va a ser más pesada la cadena.

Normal: 18 repeticiones
Mutante: 48 repeticiones

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13
Q

Microsatélites

A

DNA satélite no codifica pero es útil para identificar

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14
Q

Para qué sirven los microsatélites

A

Determinar quién se quedó con qué parte del DNA

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15
Q

DNA fingerprinting

A

Se usan microsatélites del DNA que quieres comparar con otros DNAs sospechosos.
Ej: papá o asesino

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16
Q

Southern Blot

A

Lee DNA, ayuda a detectar mutaciones en caso de que no haya un sitio específico de corte para la mutación

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17
Q

Proceso de southern blot

A

Se pone el DNA con enzimas de restricción (endonucleasa), se hacen fragmentos, se electroforisa, se pone en un gel y se pasa a un papel de nitrocelulosa, se lava y se pone con un isótopo radioactivo con DNA complementario al gen de interés, se toma una placa y se obtiene el resultado

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18
Q

rt PCR

A

Semicuantitativo: te mide pixeles, dice si hay más pero no cuánto más

Ayuda a medir niveles de RNA por la transcriptasa reversa

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19
Q

qPCR

A

Cuantitativa

BHQ: quita luz
R: brilla

También se puede hacer RT-qPCR

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20
Q

Proceso de qPCR

A

Se toman los datos del amplification plot, se convierte en curva estándar de cantidad, y se hace una melt curve, después se toma la expresión de cada gen, se cuenta y se obtiene el resultado

21
Q

Quién quita la luz en el qPCR

A

el quencher (blackhole quencher)

22
Q

Prueva COVID PCR qué PCR es

A

PCR cuantitativa
qPCR

23
Q

Northen blot

A

Ve RNA, detecta expresión del gen, es semicuantitativo

24
Q

Proceso Northen blot

A

Se mete el RNA, electroforesis, se pasa a un filtro y se pone un isótopo radioactivo, se pasa el filtro y se toma una placa

25
Control del northen blot
Expresión de actina, para que veas que fue igual en todos
26
Microarreglos
Se ponen arreglos en una placa de pozos y se ponen muestras de dos RNA, se hace transcripción reversa y se compara el DNA generado por los dos Puede ser de dos RNA separados o un RNA pero en distinto tiempo
27
Western blot
Detecta proteínas, tamaño en kDa (kilodaltons), es de lo más usado en el mundo. Las proteínas pueden ser+,-,o Gel : poliacrilamida, bisacrilamida, son neurotóxicos Tinción: azul de coomasie Semicuantitativo
28
Proceso western blot
Se ponen las proteínas, se pasan a un filtro, se exponen a anticuerpos (1° se une, 2° peroxidasa de rábano), Luminol funciona hasta que actúa la peroxidasa, es lo que se ve en la foto gris Lo rosa: rojo de Punzau
29
Se usa mucho en VIH
Western Blot
30
Electroforesis en segunda dimensión
Se tiñen con plata, dependiendo del pH y pK, las proteínas se quedan en un momento de la hoja, por lo que se pueden separar proteínas específicas
31
ELISA
Semicuantitativa: puede ser directa, indirecta o sándwich En la directa no se puede usar suero del paciente Se hace en tripletes
32
Dot blot
Elisa + western blot
33
Proceso dot blot
Se pone la proteína, se une a membrana, se meten anticuerpos, se da un color Es semicuantitativa
34
Secuenciación
Se compara DNA de base/referencia con un DNA de una persona para detectar mutaciones
35
Proceso de secuenciación
Fragmentación de DNA, se hace PCR, cada nucleótido da una señal, se hace un electroforograma Es más específica pero más cara
36
Electroforograma
Secuenciación, fragmentos de DNA ampliados por PCR, cada nucleótido da una señal El electroforograma es la manera en que se muestran los resultados de la secuenciación
37
Anomalías cromosómicas
Deleción, duplicación, inversión, sustitución, traslocación
38
Pruebas de citogenética
Sirven para ver el cariotipo, se ven en blanco y negro, se hace una tinción
39
ALL: leucemia linfoide aguda
En el cariotipo se ve el cromosoma filadelfia: sustitución 22/9 (traslocación)
40
Citogenética más utilizada
Bandas G (por tinción Gimsa)
41
Uso de tripsina en citogenética
La tripsina degrada proteínas y tiñe al cromosoma Los colorantes son afines al DNA, se tiñen más si están más condensados
42
Citogenética: Bandas C
Las bandas C tiñen heterocromatina
43
Bandas R
Lo contrario a bandas G. Se tiñe lo opuesto a lo que se tiñe en la banda G
44
FISH
Sonda complementaria con fluorescencia. Se pintan los cromosomas de acuerdo con lo que se busca: - Normal: 2 rojos, 2 verdes - Traslocación robertsoniana en leucemia: se ven 1 rojo, 1 verde y 2 amarillos
45
Tinción en FISH
Puede ser pericentromérica o pancentromérica En fluorescencia se tiñe DNA con azul "DAPi"
46
Cariotipo espectral
A cada cromosoma se le da un color. Si hay alteraciones se combinan los colores
47
CGH: arreglo citogenético
Se usa para deleciones y duplicaciones. Si se va más hacia el lado del paciente es una duplicación, si se va más hacia el control es una deleción.
48
MLPA
Se utiliza para duplicaciones o deleciones. Ayuda a detectar mutaciones concretas Tiene varios pasos: 1. Denaturalización 2. Hibridación (con MLPA probes y buffer) 3. Ligado (se añaden ligasas) 4. Amplificación con PCR 5. Separación de fragmentos dependiendo de su tamaño. Se mide con un electroferograma 6. Análisis de la información

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