Sistema de membranas citoplasmáticas Flashcards
El sistema endomembranoso está compuesto por:
- retículo endoplasmático
- Aparato de Golgi
- endosomas
- Lisosomas
- vacuolas
El sistema endomembranoso NO está compuesto por:
mitocondrias y cloroplastos
no forman parte del sistema interconectado
Analogía básica de los organelos
Cada organelo contiene un complemento particular de proteínas y esta especializado en actividades específicas, como una casa que se divide en habitaciones, y en cada habitación se hace algo diferente
La superficie combinada de las membranas citoplásmicas es mayor que la superficie de la membrana plasmática circundante.
V o F
Verdadero
Como actúa básicamente el sistema endomembranoso
los organelos son parte de una red DINÁMICA integrada en la que los materiales se envían y regresan de una PARTE DE LA CÉLULA A OTRA
Casi en su totalidad, los materiales se trasladan entre organelos
V o F
Verdadero
explicación básica de como se realizan los transportes
Ej:
Del aparato de Golgi a la membrana plasmática:
en pequeñas vesículas de transporte limitadas por la membrana de un DONADOR de membrana, las vesículas se mueven por el citoplasma, a menudo por proteínas motoras, y cuando llega a su destino, las vesículas se fusionan con la membrana del receptor, el cual recibe el cargamento soluble de la vesícula y su envoltura membranosa
Vesícula. Qué es
portadores ( esféricos pero no siempre)
Cuales son las vías por las cuales se realizan los traslados en el citoplasma
- Vía Biosintética/ secretora
2. Vía Endocítica
Vía biosintética / vía secretora
a. Se sintetiza en el retículo endoplasmático
b. Se modifican a su paso por el aparato de Golgi
c. del Golgi se transporta a varios destinos
porqué se le dice a la vía biosintética ‘‘vía secretora’’
porque muchas de las proteínas sintetizadas en el retículo endoplasmático ( así como los polisacáridos complejos producidos en el aparato de Golgi , se descargan) se secretan de la célula en virtud de sus ‘‘domicilios’’ o SEÑALES CLASIFICADORAS que están codificadas en la secuencia de aa de las proteínas o en los oligosacáridos
Las actividades secretoras de las células pueden dividirse en 2 tipos:
constitutivas y reguladas
tamaño de una vesícula esférica pequeña
25 a 50 nm
visto al TEM
tamaño de una vesícula esférica grande
0,2 a 0,5 uM
en el MO
1 uM son —– nm
1000 nm
Tamaño de una vesícula grande en nm
200 a 500 nm ( MO)
De que forma se predisponen los túbulos
como cilindros huecos
diámetro aproximado de los túbulos ( del SER)
30 a 60 nm
De que forma se disponen las cisternas
- Sacos aplanados
- Poliformes ( sin forma definida)
¿Las vesículas tienen luz y membrana?
SÍ
Que es la ‘‘luz’’
Es la cavidad interior, tipo el hueco de un tubo
Pasos simples del transporte vesicular
- Gemación
- Fisión
- Desnudación
- Transporte
- Fijación
- Acoplamiento
- Fusión
En qué consiste la ‘‘gemación’’
Es cuando del organelo DONANTE brota una yema con cubierta proteica, en cuyo interior se introduce un cargamento
En qué consiste la ‘‘fisión’’
Cuando la yema se separa ( YA ES UNA VESÍCULA LIBRE con cubierta proteica)
En qué consiste la ‘‘desnudación’’
La vesícula pierde su cubierta proteica
En qué consiste el ‘‘transporte’’
Las vesículas se unen a las dineínas, cinesinas o miosinas ( V o VI) para ser transportadas
En qué consiste la ‘‘fijación’’
El organelo receptor ATRAPA a la vesícula mediante proteínas de fijación
En qué consiste el ‘‘acoplamiento’’
contacto entre la vesícula y el organelo receptor
En qué consiste la ‘‘fusión’’
las membranas de las vesículas y del receptor se vuelven 1, y la vesícula descarga su contenido en la luz del receptor
Qué son las proteínas de transferencia
Algunos organelos se pueden relacionar con otros mediante estas PROTEÍNAS CITOSÓLICAS ej: lleva un fosfolípido del SER a la MNE de la mitocondria
Cuáles fueron los estudios que se realizaron de las endomembranas
- Pulso y caza
- Uso de VSV-GFP
- Análisis bioquímico de fracciones subcelulares (estudio libre de células).
- Estudio de fenotipos mutantes.
- Interferencia de ARN
Que tiene de especial las células acinares del páncreas
su sistema de endomembrana es extenso
Cuál es la función de las células acinares del páncreas
síntesis Y secreción de enzimas digestivas.
Después de la secreción pancreática, estas enzimas se llevan al INTESTINO DELGADO mediante conductos donde degradan el alimento ingerido
Quien se encarga de la síntesis Y secreción (la descarga) de enzimas digestivas.
Las células acinares del páncreas
Que se hizo para poder seguir los pasos desde la síntesis de proteínas secretoras hasta su salida de la célula
AUTORRADIOGRAFÍA
(Jamieson y Palade)
sirve para visualizar los procesos bioquímicos al permitir que se pueda ver la localización de materiales con marca radiactiva dentro de una célula
Que hicieron Jamieson y Palade para reconocer cuales son los puntos en los que se sintetizan las proteínas secretoras ( pasos ) autorradiografía.
- Incubaron fragmentos de tejido pancreático en una solución con aa radiactivos durante un periodo corto
- Las células vivas captaron los aa marcados y los incorporaron a las enzimas digestivas que se sintetizaban en los ribosomas.
- Los tejidos se fijaron y con esta técnica se identificó la localización de las proteínas que se habían sintetizado durante ese breve periodo de tiempo
—El retículo endoplasmático es donde se sintetizan las proteínas secretoras—
En que sitio (descubierto por Jamieson y Palade) se sintetizan las proteínas secretoras
En el retículo endoplasmático
Que hicieron luego de descubrir el sitio donde se sintetizan las proteínas secretoras
Quisieron determinar la vía intracelular que siguen las proteínas secretoras hasta el sitio donde se secretan.
HICIERON LA TÉCNICA PULSO Y CAZA
En que consiste la técnica pulso y caza
Para poder seguir los movimientos de la célula
Pulso: Incubación breve con radiactividad donde los aa marcados se incorporan a la proteína.
Caza: El tejido se lava ( retirar el exceso de isótopos) y se expone a un medio NO MARCADO, donde se sintetizan proteínas con aa no marcados.
( a mayor tiempo en caza, más lejos se desplazan las proteínas radiactivas)
Cuál fue un resultado de la técnica pulso y caza
se descubrió la vía biosintética/secretora
a mayor tiempo en caza, más lejos se desplazan las proteínas radiactivas.
V o F
verdadero
Pulso y caza es una técnica de autorradiografía
V o F
V
Pasos en el ‘‘Pulso y caza’’
- La muestra se incuba en LEUCINA TRITIADA ( Leu-3H) por 3 minutos ( pulso)
- Se extrae una parte de la muestra y se prepara para TEM ( marcas de Ag en el RER) durante 17 min.
- Al minuto 20’ se extrae otra parte de la muestra y se prepara para autorradiografía ( Ag en el Golgi) 100 min.
- Al minuto 117’ o 120’ se extrae una 3° parte de la muestra y se prepara con autorradiografía ( marcas de Ag en las vesículas de secreción)
Cuanto tiempo tardan los aa radiactivos en incorporarse a las proteínas ( en pulso y caza)
3 minutos
¿En la técnica pulso y caza se usa el TEM ?
sí, luego del ‘‘pulso’’ se ve Ag en el RER durante 17 min
Que se realiza en el minuto 20’ en pulso y caza
se extrae una 2° parte de la muestra y se prepara para autorradiografía ( marcas de Ag en el Golgi)
Cuantos minutos tarda la proteína en el RER
17 min
Cuantos minutos tarda la proteína en el Golgi
100 min
Que se ve después de que la proteína haya pasado 100 min en el Golgi
Al minuto 117 o 120 se ve Ag en las vesículas de secreción/ gránulos secretores
Que es lo ‘‘nuevo’’ del descubrimiento del GFP
se puede ver los movimientos de las proteínas específicas mientras ocurre en una célula viva, el GFP tiene poco o ningún efecto en el movimiento o función de esa proteína.
Que es el ADN quimérico
cuando el ADN que codifica al GFP se fusiona con el ADN que codifica a la proteína que se va a estudiar, y el ADN quimérico (resultante) se introduce en las células, una vez dentro, el ADN quimérico expresa una proteína quimérica que consiste en GFP fusionada con el final de la proteína que se va a estudiar.
Que es el vsv
Cepa del virus de la estomatitis vesicular
En qué consiste básicamente la técnica VSV-GFP
uno de los genes virales de la vsv: La VSVG
se fusiona con el gen de GFP ( 1 hora)
Trayecto de la proteína vsvg
se produce en el retículo endoplasmático, viajan por Golgi y se transportan a la membrana plasmática de la célula infectada donde se incorporan envolturas virales
Que ocurrió cuando se estudió una proteína con vsvg mutante
No puede salir del retículo endoplasmático de las células a 40°C o una temperatura elevada.
Si la temperatura se reduce a 32°C durante 10 min, la proteína fluorescente GFP-VSVG que se había acumulado en el retículo endoplasmático se mueve al aparato de Golgi y luego a la MP. Estos se llaman ‘‘mutantes sensibles a la temperatura’’
¿Que quisieron hacer Claude y Deduve?
Quisieron saber la composición química de los organelos, cosa que la microscopia electrónica, la autorradiografía y el uso de GFP no muestran.
Entonces utilizaron técnicas para romper las células y aislar los tipos particulares de organelos.
Se extraen los componentes del sistema endomembranoso por centrifugación (diferencial y en gradiente de densidad) ( homogeneizado)
Que es el fraccionamiento celular
Cuando una célula se rompe por homogeneización, las MEMBRANAS CITOPLASMÁTICAS se fragmentan y los bordes de los fragmentos de la membrana se fusionan para formar vesículas esféricas menores de 100 nm de diámetro
Que son los microsomas
Las vesículas membranosas del sistema de endomembranas ( Ej: Golgi, Retículo endoplasmático,
etc.) forman colecciones HETEROGÉNEAS de vesículas de tamaño similar que son los MICROSOMAS ( luego del fraccionamiento celular)
¿La fracción microsómica puede segmentarse aún más?
SÍ, en fracciones de membrana lisa y rugosa mediante técnicas de gradiente
Y cómo se identifica la composición bioquímica de los organelos
Una vez que todas las fracciones estén aisladas, se extrae proteínas, se separan y se identifican por espectometría de masas,etc.
Que se obtiene con la centrifugación de la muestra
- Fracción nuclear ( envol. nuclear).
- centrifugar 20 000 g
- 20 min - Fracción mitocondrial (lisosomas).
- centrifugar 50 000 g
- 2 horas - Fracción microsomal ( RER,SER,Golgi).
- Fracción soluble
( hasta el 3, a estudio)
Con esta técnica, se descubrió la cantidad de proteínas del Fagosomas, que son:
160 proteínas
Quienes se dedicaron a aprender más sobre las propiedades de la fracción microsómica rugosa que deriva del retículo endoplasmático rugoso
Palade y Siekevitz