Control de la expresión génica, transcripción y el transcrito 1rio Flashcards
Diferenciacion celular
Expresion y represion de genes, y para controlar esto se requiere del control de la expresion genica
La diferenciacion celular se puede realizar de dos formas:
- REPROGRAMACION
- CLONACION
Como se realiza o que características tiene la reprogramación celular
Consiste en pasar un tipo celular————–> a otro tipo celular ( forzarle la expresión de genes suprimidos)
Puede ser:
* TRANSDIFERENCIACION
celula adulta————> otra celula adulta
Fibroblasto—————> miocito ( por la expresion del gen que codifica el factor de transcripcion MYOD)
que es un factor de control maestro
*DESDIFERENCIACION
Celula adulta—–> Celula madre pluripotencialmente inducida (IPS)
Se fuerza la expresion de los genes de los factores de transcripcion: OCT 4, SOX2, MYC y KIF4
Como se realiza o que características tiene la Clonacion
Generar un organismo GENETICAMENTE identico.
1° Se extrae el nucleo de una celula del organismo que se desea clonar.
2° se extrae un ovocito ‘‘ovulo’’ de un organismo adulto y se le quita el nucleo (enucleado)
3° se Inserta el nucleo del que quiero clonar en el ovocito que no tiene nucleo
4° tengo el cigoto clon
Que es un factor de control maestro
Cuando se requiere de 1 SOLO factor de transcripcion para poder modificar totalmente el fenotipo de un organismo
Que son los métodos de estudio de la actividad Génica
Sirven para estudiar QUÉ genes estan activos o inactivos y QUÉ factores de transcripcion lo regulan
Cuales son los métodos de estudio de la actividad Genica
- Micromatrices de DNA (Chip.ADn)
- Inmunoprecipitacion de cromatina (CHIP-CHIP-)
Micromatrices de ADN
Comparar la actividad génica de 1 o + TIPOS CELULARES DIFERENTES.
- Prep. de la matriz :
- se extraen los genes de un genoma
- se almacenan los genes en los ‘‘pozos’’
- se transfieren los genes por separado al portaobjeto - Prep. de la muestra:
- Se extraen todos los mRNA ( mediante transcripción inversa)
- se generan copias de ADN o cDNA marcados con fluorocromos. - Hibridacion:
- La matriz (chip) se sumerge en una solucion salina caliente que contiene los cDNA, y estos se hibridan con los genes que tienen las secuencias complementarias.
Colores de las micromatrices
Sin color: Genes inactivos en ambas celulas
Amarillo: Genes activos en ambas celulas
Verde: activo en una celula
rojo: Activo en la otra celula
Inmunoprecipitación de Cromatina (chip-chip)
Para Reconocer la secuencia de ADN a las que se unen los FACTORES DE TRANSCRIPCION
Inmunoprecipitación de Cromatina (chip-chip). Pasos
- Preparacion de la matriz:
- se extraen las SECUENCIAS INTERGENICAS( incluyen promotores y reguladores) de un genoma
- se colocan en pozos y se transfieren un portaobjeto de vidrio - Reparacion de la muestra:
- Se deja que los Fact. de transcripcion se unan normalmente
- Se digiere el ADN donde No esta el Fact. de Trans. por una DNAasa
- se exponen los pequeños fragmentos a anticuerpos especificos para los FdeT
- Se eliminan el anticuerpo + y el factor
- Me sale el ADN donde se unen. - Hibridacion
- Se sumerge la matriz en una solucion salina caliente que contiene el cDNA.
- Se hibrida con las secuencias complementarias
- se extrae y se mira con el MO de fluorescencia
El control de la expresión génica se produce en 4 niveles, los cuales son…
- Control a nivel de la transcripción del gen
- Control a nivel del proc. del transcrito 1rio
- Control a nivel de la traducción
- Control a nivel post-traduccional
Control a nivel de la transcripción del gen
MÁS IMPORTANTE
—- Depende de proteínas llamadas FACTORES DE TRANSCRIPCION——-
Y se agrupan en 3 grupos:
promotores proximales, promotores distales y potenciadores
——————Secuencias Génicas——————
PROMOTORES PROXIMALES
- entre +1 y -150
- ej: caja TATA(prom. central) (-32 y -24)—-> TFIID
caja GC -100———–> Sp-1
caja CAAT -110——–> NF-1
PROMOTORES DISTALES (REGULADORES)
- entre -150 y -400
- ej: caja GRE——> factor Gr
caja TRE———–> Factor TR
caja IRE————> factor IR
POTENCIADORES (reguladores)
se hallan a miles de p de b
Factores de Transcripción
Proteinas que poseen dominios llamados motivos de union a ADN.
- Poseen helices alfa lectoras (del surco mayor) (ricas en aa y carga +)
- Forma interacciones con los p de b nitrogenados