Control de la expresión génica, transcripción y el transcrito 1rio Flashcards
Diferenciacion celular
Expresion y represion de genes, y para controlar esto se requiere del control de la expresion genica
La diferenciacion celular se puede realizar de dos formas:
- REPROGRAMACION
- CLONACION
Como se realiza o que características tiene la reprogramación celular
Consiste en pasar un tipo celular————–> a otro tipo celular ( forzarle la expresión de genes suprimidos)
Puede ser:
* TRANSDIFERENCIACION
celula adulta————> otra celula adulta
Fibroblasto—————> miocito ( por la expresion del gen que codifica el factor de transcripcion MYOD)
que es un factor de control maestro
*DESDIFERENCIACION
Celula adulta—–> Celula madre pluripotencialmente inducida (IPS)
Se fuerza la expresion de los genes de los factores de transcripcion: OCT 4, SOX2, MYC y KIF4
Como se realiza o que características tiene la Clonacion
Generar un organismo GENETICAMENTE identico.
1° Se extrae el nucleo de una celula del organismo que se desea clonar.
2° se extrae un ovocito ‘‘ovulo’’ de un organismo adulto y se le quita el nucleo (enucleado)
3° se Inserta el nucleo del que quiero clonar en el ovocito que no tiene nucleo
4° tengo el cigoto clon
Que es un factor de control maestro
Cuando se requiere de 1 SOLO factor de transcripcion para poder modificar totalmente el fenotipo de un organismo
Que son los métodos de estudio de la actividad Génica
Sirven para estudiar QUÉ genes estan activos o inactivos y QUÉ factores de transcripcion lo regulan
Cuales son los métodos de estudio de la actividad Genica
- Micromatrices de DNA (Chip.ADn)
- Inmunoprecipitacion de cromatina (CHIP-CHIP-)
Micromatrices de ADN
Comparar la actividad génica de 1 o + TIPOS CELULARES DIFERENTES.
- Prep. de la matriz :
- se extraen los genes de un genoma
- se almacenan los genes en los ‘‘pozos’’
- se transfieren los genes por separado al portaobjeto - Prep. de la muestra:
- Se extraen todos los mRNA ( mediante transcripción inversa)
- se generan copias de ADN o cDNA marcados con fluorocromos. - Hibridacion:
- La matriz (chip) se sumerge en una solucion salina caliente que contiene los cDNA, y estos se hibridan con los genes que tienen las secuencias complementarias.
Colores de las micromatrices
Sin color: Genes inactivos en ambas celulas
Amarillo: Genes activos en ambas celulas
Verde: activo en una celula
rojo: Activo en la otra celula
Inmunoprecipitación de Cromatina (chip-chip)
Para Reconocer la secuencia de ADN a las que se unen los FACTORES DE TRANSCRIPCION
Inmunoprecipitación de Cromatina (chip-chip). Pasos
- Preparacion de la matriz:
- se extraen las SECUENCIAS INTERGENICAS( incluyen promotores y reguladores) de un genoma
- se colocan en pozos y se transfieren un portaobjeto de vidrio - Reparacion de la muestra:
- Se deja que los Fact. de transcripcion se unan normalmente
- Se digiere el ADN donde No esta el Fact. de Trans. por una DNAasa
- se exponen los pequeños fragmentos a anticuerpos especificos para los FdeT
- Se eliminan el anticuerpo + y el factor
- Me sale el ADN donde se unen. - Hibridacion
- Se sumerge la matriz en una solucion salina caliente que contiene el cDNA.
- Se hibrida con las secuencias complementarias
- se extrae y se mira con el MO de fluorescencia
El control de la expresión génica se produce en 4 niveles, los cuales son…
- Control a nivel de la transcripción del gen
- Control a nivel del proc. del transcrito 1rio
- Control a nivel de la traducción
- Control a nivel post-traduccional
Control a nivel de la transcripción del gen
MÁS IMPORTANTE
—- Depende de proteínas llamadas FACTORES DE TRANSCRIPCION——-
Y se agrupan en 3 grupos:
promotores proximales, promotores distales y potenciadores
——————Secuencias Génicas——————
PROMOTORES PROXIMALES
- entre +1 y -150
- ej: caja TATA(prom. central) (-32 y -24)—-> TFIID
caja GC -100———–> Sp-1
caja CAAT -110——–> NF-1
PROMOTORES DISTALES (REGULADORES)
- entre -150 y -400
- ej: caja GRE——> factor Gr
caja TRE———–> Factor TR
caja IRE————> factor IR
POTENCIADORES (reguladores)
se hallan a miles de p de b
Factores de Transcripción
Proteinas que poseen dominios llamados motivos de union a ADN.
- Poseen helices alfa lectoras (del surco mayor) (ricas en aa y carga +)
- Forma interacciones con los p de b nitrogenados
Los motivos de union de un factor de transcripcion a ADN pueden ser:
- DEDOS DE ZN
- en el GTF llamado TFIIA
- 2 laminas beta y 1 helice alfa
- His y Cys + Zn
- HELICE-ASA-HELICE (HLH)
- en el STF llamado MYC
- se disponen como homo o heterodimeros.
- CREMALLERA DE LEUCINA (LEU-ZIP)
- STF llamado AP-1
- 2 helices alfa y bZip llamadas FOS Y JUN
- 1 Leu cada 2 vueltas (7,2 nm)
Los factores de Transcripción se clasifican en dos grandes grupos que son…
- Generales (GTF) ——–> prom proximales
- Especificos (STF)———>prom. distales y potenciadores ( reguladores)
Tipos de GTF
- De mRNA:
Nf1, Sp-1, TFII A,B,D,E,F,H - De rRNA 45s:
SL-1 - De rRNA 5s y tRNA:
TFIII A,B,C.
Tipos de STF
ACTIVADORES
favorecen la transcripción
ej, GR (F. de resp. a glucocorticoide)
TR (F. de resp. a hormona tiroidea)
IR (F. de resp. a insulina)
REPRESORES
impiden la transcripción
ej: XIST RNA (INC)
Como actuan los STF activadores
Reclutan y activan a co activadores
- los que activan a la RNA polim (factores de elongación o los TAF). :)
- los que modifican histonas( hacen PTM a las colas de histonas, ej HAT Cpb, HMT set 1 set 2) =D
- Remodelan la cromatina (SWI/SNF :D) alteran la relacion entre el ADN y el octamero histonico, exponen la caja tata, etc.
Como actuan los STF represores
Activan otra co represores
- que pausan a la RNA polim: DISF Y NELF
- que modifican histonas: HDAX (sin3) , HDMT(Lsd-1), SOUV39H1
- que metilan ADN: caja GC provocan el silenciamiento del gen ej. DNMT-1
Impronta Genomica
En mamiferos, 80 LOCI son silenciados por metilacion del ADN. este patron de silenciacion depende del ORGEN PARENTAL que recibe este nombre,
Gracias a la impronta la celula sabe cual cromosoma fue dado por la madre o el padre y le permite detectar anomalias
Síndrome de Prader-willy
- PAR 15
- Existe solo el alelo materno
- el paterno esta a la mitad
- obesidad, hambre insaciable, facilidad para llorar
Síndrome de Angelman
- PAR 15
- Existe solo el alelo paterno
- delgadez extrema, risa incontrolable
