Seleção das Bactérias Transformadas → Seleção Azul / Branca Flashcards
Bactéria de meu interesse:
Aquelas que tem o plasmídeo com o inserto.
Seleção Azul / Branca - Importância
Para eu saber quem tem o plasmídeo com o inserto.
Placa de Cultura - Adicionamos 3
Antibiótico
IPTG no meio.
X-gal
IPTG - Função
Induz a expressão do gene Lac Z → que expressa a B-galactosidade.
Bactérias - Ao se proliferarem:
Todas as bactérias que conseguiram absorver o plasmídeo serão resistentes ao antibiótico.
X-Gal - Função
Mostra a colônia de bactérias que não recebeu o inserto.
Colônia de Bactérias - Quando não recebeu o inserto:
Vai ter a capacidade produzir a enzima B-galactosidade.
Enzima B-galactosidade → quebra / hidrolisa o X-Gal → e a colônica fica azul.
Colônia de Bactérias - Quando recebeu o inserto:
Não vai ter a capacidade produzir a enzima B-galactosidade.
Não produz B-galactosidade → X-Gal fica quietinho envolta das células → não vai ser quebrado → célula fica branca.
Colônia Azuis → ?
Colônias Brancas → ?
Colônia Azuis → não receberam o inserto
Colônias Brancas → receberam o inserto
Azul → ?
Branca → ?
Azul → não recebeu o plasmídeo com o inserto
Branca → recebeu o plasmídeo com inserto
Colônia Azul → não recebeu o plasmídeo com o inserto:
Gene Lac Z → ?
Gene Lac Z → funciona → produz enzima → hidrolisa X-Gal → tingindo a colônia de azul.
Colônia Branca → recebeu o plasmídeo com inserto:
Gene Lac Z → ?
Gene Lac Z → não funciona → não produz enzima → não hidrolisa X-Gal → colônia fica da cor branca.