Plasmídeo de Expressão Flashcards
Plasmídeo de Expressão - Uso
Quando se deseja expressar / produzir proteínas.
Plasmídeo de Expressão vs Plasmídeo de Clonagem
Possui os elementos normais do plasmídeo de clonagem (3 primeiros ítens do slide) + a Região Promotora
Plasmídeo de Expressão - Elementos 4
ORI → Origem de Replicação
Gene que confere resistência a antibióticos (amp^R)
Polilynker / MSC → Mútiplos Sítios de Clonagem
Região Promotora
Plasmídeo de Expressão - Polilynker / MSC → Função
Interrompe o gene Lac Z
Gene Lac Z - Função
Produz enzima B-galactosidade
Plasmídeo de Expressão - Polilynker / MSC → Contém
As Enzimas de Restrição
Se tu coloca o o polylinker / MSC que interrompe o Gene Lac:
Ele não é expresso → e a bactéria não desenvolve a enzima que o Lac Z produz (B-galactosidade).
Plasmídeo de Expressão - Região Promotora
Localizada antes do Gene Lac Z.
Para ser sintetizado → RNApol → reconhece a região promotora do gene Lac Z.
Região Promotora - Inibida / Induzida
Inibida → ? → ?
Induzida → ? → ?
Região Promotora - Inibida / Induzida
Inibida → não é reconhecida → não ocorre a produção da proteína à partir do gene
Induzida → reconhecida e ativada → ocorre a produção da proteína à partir do gene
IPTG - O que é?
Indutor sintético da expressão do gene Lac Z.
Plasmídeo de Expressão - Seleção dos Transformantes → Forma diferente:
Por X-gal.
Plasmídeo de Expressão - Seleção dos Transformantes → Importância
Nem todas as bactérias que receberam o plasmídeo receberam o plasmídeo com inserto que confere resistência ao antibiótico → precisamos descobrir quem recebeu e quem não recebeu → e por isso utilizamos o X-gal.
