4ª Etapa - Precipitação do DNA Plasmidial Flashcards
Precipitação do DNA Plasmidial - Procedimento 3
Adição de etanol → centrifugar.
Na presença de álcool → o DNA se agrupa.
Isso é feito para que os plasmideos solúveis se agrupem.
Centrifugação - Procedimento 3
15m
4° C
13k/rpm
Centrifugação - Procedimento → Após 2
Pellet → grudado tudo no fundo
Vira eles → desprezando o meio → mas mantendo tudo grudado no fundo
DNA - Após jogar fora o que está sobre o Pellet e secar bem o tubo:
Pellet → é dissolvido.
Pellet - Dissolução - 2 formas de dissolver o Pellet:
Água Bi-destilada
EDTA
Água Bi-destilada - Nome “Comercial”
Água Milli-Q / M.Q.
Água Milli-Q / M.Q. - O que é?
Água Destilada → autoclavada, livre de nucleases
EDTA - Nome
Ácido Etilenodiaminotetracético
EDTA - Quando o utilizamos?
Quando precisamos ter mais cuidado.
EDTA - Importância
Ácido → protege mais o seu DNA → degradando as nucleases → inibindo toda e qualquer ação.