Séance I-ELISA

Question 1

c’est quoi l’ELISA

Answer 1

méthode de dosage protéique basé sur l’interaction de la protéine avec l’Ac qui utilise une courbe de référence

Question 2

Différence entre ELISA direct, indirect et sandwich

Answer 2

direct=seulement Ac primaire
indirect=Ac primaire then Ac secondaire
sandwich= Ac primaire dans le puit first, then Ag, then Ac prim and then Ac secondaire

Question 3

1 avantage pour ELISA direct

Answer 3

moins d’étapes donc rapid

Question 4

2 inconvénients pour ELISA direct

Answer 4

trop de temps pour conjuger chaque Ac primaire à l’enzyme et immunoréactivité de l’Ac peut être affectée

Question 5

1 avantage pour ELISA indirect

Answer 5

grande variété d’Ac secondaire disponible

Question 6

2 inconvénients pour ELISA indirect

Answer 6

réaction croisée avec Ac secondaire qui peut causer un manque de spécificité et plus lent (plus d’étapes)

Question 7

3 méthodes de détection pour ELISA

Answer 7

colorimétrique, chemiluminescence, chemifluorescence

Question 8

Ac monoclonaux vs polyclonaux

Answer 8

mono= spécificité élevée, réduit bruit de fond, élimine réactions croisés

poly=facile et rapide à produire, moins sensibles aux changements sur l’Ag car peuvent reconnaitre plusieurs épitopes, utile si nature de l’Ag inconnue

Question 9

7 étapes pour l’ELISA indirect avec le système de phosphatase alcaline

Answer 9

1) ajouter Ag+incubation
2) lavage+ blocage par BSA
3) ajout Ac primaire et incubation
4) lavage
5) ajout Ac secondaire (couplé à la phosphatase)
6) ajout substrat de l’enzyme (PNP)
7) ajout de NaOH pour arrêter la réaction (dénature l’enzyme)

Question 10

à quelle longueur d’onde la réaction de phosphatase alcaline se passe

Answer 10

410-420nm