Séance D-chromatographie d'affinité

Question 1

c’est quoi les 3 catégories pour la classification des méthodes de purification des protéines

Answer 1

charge, polarité et poids moléculaire

Question 2

3 méthodes de purification protéique d’après la charge

Answer 2

Électrophorèse SDS-PAGE, chromatographie d’échange ionique, focalisation isoélectrique

Question 3

4 méthodes de purification protéique d’après la polarité

Answer 3

chromatographie d’adsorption, chromatographie en phase inversée, chromatographie d’interactions hydrophobes, chromatographie sur papier/couche mince

Question 4

4 méthodes de purification protéique d’après le poids moléculaire

Answer 4

dialyse et ultrafiltration, électrophorèse SDS-PAGE, chromatographie filtration sur gel, ultracentrifugation

Question 5

c’est quoi le coefficient de partage en chromatographie

Answer 5

rapport entre la concentration de Ps et Pm (phase stationnaire et phase mobile)
Kp=[Ps]/[Pm]

Question 6

4 exemples de chromatographie liquide

Answer 6

chromatographie d’échange ionique, chromatographie en phase inverse, chromatographie d’exclusion sur gel, chromatographie d’affinité

Question 7

c’est quoi la composition chimique des résines Sephadryl, Sephadex, Sepharose

Answer 7

sephdryl-acrylamide
sephadex-dextran
sepharose-agarose

Question 8

Comment les molécules passent à travers de la résine (petites moléc, moyennes et grandes)

Answer 8

les petites molécules passent facilement [] dans résine=[] hors résine
les moyennes molécules passent moins facilement à travers de la résine [] dans résine< []hors résine
les grandes molécules ne passent pas à travers de la résine. [] dans résine=0

Question 9

c’est quoi la composition du sephadex G-75

Answer 9

résine qui contient des billes préparées par réaction de réticulation entre dextran et épichlorydrine

Question 10

pourquoi on utilise le sephadex G-75 en chromatographie d’affinité

Answer 10

car il contient du dextran (polymère de glucose pour ConA) et il permet le dessalage de larges macromolécules (PM>80kDa)

Question 11

c’est quoi la chromatographie d’affinité en général

Answer 11

c’est une technique qui utilise la reconnaissance d’un ligand spécifique. utilise interactions réversibles entre protéine et ligand de Ps et ensuite l’élution avec la phase mobile (Pm)

Question 12

3 étapes de la chromatographie d’affinité

Answer 12

1) fixation
2) purification (lavage)
3) élution

Question 13

c’est quoi les 5 méthodes de dosages de protéines

Answer 13

1) absorption UV de chaines latérales (280nm) ou de liens peptidiques (205nm)
2) réactions chromogéniques sous conditions alcalins (test de biuret)
3) liaison d’un chromophore à la protéine (Bradford)
4) Dot-blotting
5) BCA

Question 14

pros and cons for absorption UV pour dosage protéique

Answer 14

se fait directement sur la membrane mais a beaucoup d’interferences comme acides nucléiques, acides, détérgents et sels

Question 15

pros and cons for méthode BCA

Answer 15

compatible avec détérgents mais a des interferences comme agents réducteurs et chelateurs lipidiques

Question 16

pros and cons for bradford/coomassie

Answer 16

compatible avec agents réducteurs, l’interferant est le détérgent

Question 17

pros and cons for dot-blot

Answer 17

criblage rapide des échantillons, no cons

Question 18

c’est quoi la différence entre les cuvettes de quartz et les cuvettes en plastique

Answer 18

plastique: jetables, non résistants en présence de solvant organique
Quartz:réutilisable, résistant aux solvants organiques, fragiles, lavé avec éthanol et eau

Question 19

Comment calculer la concentration en fonction de l’absorbance (3 scénarios)

Answer 19

1) si c’est un mélange de protéines-concentration=absorbance
2) protéine pure-[]=absorbance/coefficient d’extinction molaire
3) si les acides nucléiques sont présents- []=1.55A280 (absorbance protéine)-0.75A260(Aabsorbance Acide nucléique)