Séance E-électrophorèse I

Question 1

c’est quoi le principe derrière l’électrophorèse

Answer 1

migration des molécules chargées dans un champs électrique

Question 2

la vitesse de migration dans le gel dépend de 6 facteurs, nomme les

Answer 2

intensité du champ électrique
taille/poids de la molécule
charge de la molécule
T°C
durée de la migration
taille des pores du gel ([acrylamide])

Question 3

c’est quoi les 6 types d’électrophorèse

Answer 3

1) d’après taille/PM (SDS-PAGE)
2) d’Après densité de charge (PAGE non dénaturant)
3) d’après charge de la protéine au pH du milieu (focalisation isoélectrique)
4) d’après pH particulier et PM (électrophorèse 2D)
5) d’après activité enzymatique (zymogrammes pour enzymes de type MMP)
6) migration dans un capillaire (électrophorèse capillaire)

Question 4

2 types de supports solides pour l’électrophorèse

Answer 4

papier et gel

Question 5

2 types de papier utilisés pour l’électrophorèse

Answer 5

1) papier filtre
2) acétate de cellulose

Question 6

3 types de gels pour électrophorèse

Answer 6

amidon, agarose (pour acides nucléiques) et polyacrylamide (pour protéines)

Question 7

quelles sont les 2 substances chimiques qui initient la polymérisation du gel d’acrylamide

Answer 7

TEMED et APS

Question 8

c’est quoi le paramètre de %T d’un gel PAGE

Answer 8

% total de bis+acrylamide par 100mL

Question 9

c’est quoi le paramètre de %C du gel PAGE

Answer 9

% de bisacrylamide dans la qté totale de bis+acrylamide

Question 10

c’est quoi les 5 tampons d’électrophorèse et leur pH

Answer 10

1) tampon barbiturique-pH 8
2)tampon phosphate-pH 7
3) tampon tris-borate-EDTA, pH 8
4) Tampon tris-acétate-EDTA, pH 8
5) Tampon tris-glycine, pH 8

Question 11

c’est quoi la différence entre SDS-PAGE et PAGE native

Answer 11

SDS-PAGE: séparation d’après le PM, dénature, utilisé pour verifier pureté de la protéine

PAGE-native: séparation d’Après la charge et forme, ne dénature pas, protéine peut être recupérée+reutilisée

Question 12

c’est quoi le rôle de SDS

Answer 12

uniformiser la densité de charge des protéines

Question 13

c’est quoi le rôle du mercaptoéthanol

Answer 13

réduire les ponts disulfure

Question 14

c’est quoi la différence entre les gels continus et discontinus

Answer 14

continu=même [acrylamide] dans le gel, un seul tampon
Discontinu= gradient de [acrylamide], différents tampons

Question 15

c’est quoi le système de Laemmli

Answer 15

système PAGE discontinu qui utilise 2 gels (tassement et séparation) avec [acrylamide] différentes, tampons différents et permet d’utiliser de larges volumes d’échantillons