Séance G- électrophorèse II

Question 1

c’est quoi le rôle du glycérol

Answer 1

faciliter sédimentation au fond des puits pour les protéines

Question 2

rôle du mercaptoéthanol

Answer 2

dénaturer les protéines par réduction des liaisons disulfure

Question 3

rôle du bleu de bromophénol

Answer 3

permet de suivre la progression de la migration

Question 4

pH et composition du gel de tassement (STACKING)

Answer 4

6.8 et Tris-HCl

Question 5

pH et composition du gel de séparation

Answer 5

8.8 et Tris-HCl

Question 6

pH et composition du tampons de migration

Answer 6

8.3 et Tris-gly

Question 7

que se passe dans le gel de tassement

Answer 7

une concentration des protéines avant leur migration

Question 8

2 facteurs qui causent la concentration des protéines dans le gel de tassement

Answer 8

1) [acrylamide] trop faible pour séparer les protéines
2) Cl,protéines et glycine causent un phénomène d’isotachophorèse

Question 9

Que se passe pendant l’isotachophorèse dans le gel de tassement

Answer 9

Cl- et glycinate generent un champ électrique discontinu qui cause en fait que cl- migre plus rapidement, protéines migrent juste après car chargées négativement et gly migre le moins rapidement sans se mélanger

Question 10

Que se passe dans le gel de tassement+séparation suite à l’application d’un courant électrique

Answer 10

à pH6.8 (tassement)=la gly devient un zwitterion (charge +/-), les cl- se déplacent assez vite aussi, et les protéines se déplacent entre cl- et gly.
à pH 8.8 (séparation)=glycine redevient - et devient plus vite. le sandwich disparait et la [acrylamide] est plus grande donc protéines ralenties et séparés

Question 11

3 méthodes de détection des bandes après l’électrophorèse

Answer 11

1) Détection avec colorants organiques (bleu de coomassie)
2) Détection avec sondes fluorescentes (SYPRO)
3) Détection par liaison d’un métal (coloration à l’argent)

Question 12

c’est quoi la méthode Coomassie

Answer 12

méthode de détection par colorant qui lie aux résidus His,Lys,Arg. Le nombre de molécules de coomassie est proportionnel au # de résidus basiques et se voit à 595nm

Question 13

c’est quoi la méthode SYPRO

Answer 13

méthode de détection par sondes fluorescente. Compatible avec la spectrométrie de masse

Question 14

c’est quoi la coloration à l’argent

Answer 14

méthode de détection la plus sensible. Argent se lie aux résidus Asp,Glu,His,Cys et Lys. Incompatible avec le spectre de masse