Séance B-homogénisation¢rifugation

Question 1

Pourquoi c’est important de faire l’extraction comme prémière étape pour une purification protéique

Answer 1

c’est important pour sortir la protéine d’interet de sa matrice naturelle sans sa dénaturation

Question 2

c’est quoi les 9 différentes méthodes d’extraction

Answer 2

1) Choc osmotique
2) détergents
3)digestion enzymatique
4) homogénéisateur de type dounce
5) homogénéisation
6) moudre avec sable/billes de verre
7) Décompression explosive avec azote liquide
8)moudre avec billes
9)Ultrasonication

Question 3

Pourquoi la centrifugation est importante pendant la purification protéique

Answer 3

Parce que son premier but est de séparer les débris cellulaire des composantes solubles. Ensuite, elle va separer la fraction soluble en plusieurs sous-fractions

Question 4

si on effectue une centrifguation différentielle, quel sera le premier, deuxième, troisième et quatrième dépôt suite à la centrifugation du homogénat, surnageant 1, surnageant 2 et surnageant 3 respectivement?

Answer 4

après centri d’homogénat- dépot des noyaux car plus gros
Après centri surnageant 1-mitochondrie (majorité), lysosome et peroxisome (en partie)
Après centri surnageant 2-mitochondrie (restant), lysosome et peroxisome (majorité)
Après centri surnageant 3- microsomes, golgi, RER, REL

Question 5

Comment utiliser un nomogramme pour les centrifugeuses

Answer 5

on prend la force centrifuge et le rayon et on les relie par une règle. Après que la règle est prolonguée, on peut trouver la RPM associée aux valeurs utilisés

Question 6

C’est quoi la centrifugation différentielle et quel principe est utilisé pour la séparation

Answer 6

c’est la sédimentation dans un liquide après une extraction et elle utilise la différence de densité et taille des composantes pour la séparation

Question 7

c’est quoi un système continue de centrifugation différentielle

Answer 7

utilisation de différentes vitesses de centrifugation

Question 8

c’est quoi une système gradient de centrifugation différentielle

Answer 8

utilisation de vitesses de centrifugation identiques ou différentes