Séance C-dialyse&précipitation différentielle

Question 1

c’est quoi le principe de la dialyse

Answer 1

séparation de solutés par équilibre dans un solvant à travers d’une membrane semi-perméable qui laisse passer des molécules de taille spécifique

Question 2

c’est quoi MWCO (molecular weight cutoff)

Answer 2

le poids moléculaire d’un soluté qui peut seulement diffuser à travers de la membrane à moins de 10% (retenue à plus de 90%)

Question 3

c’est quoi les 4 différents formats de la dialyse

Answer 3

1) membrances
2) casettes
3) plaque 96 puits (pour microdialyse)
4) serpents

Question 4

Comment la dialyse est utilisée pour la purification protéique

Answer 4

Elle diminue la concentration en sels (après une précipitation différentielle par exemple) et ainsi diminue interférence possible pour les tests ultérieurs

Question 5

C’est quoi les 4 paramètres qui peuvent affecter la solubilité de la protéine

Answer 5

1) propriétés physiques de la protéine (forme, PM, pI)
2) distribution des résidus hydrophiliques/hydrophobiques et des charges en surface
3) température et pH de solution
4) composition et concentration des cosolutés

Question 6

Comment le pI influence la solubilité de la protéine

Answer 6

quand le pH<pI les AA sont chargés positivement et tous ses AA vont se repousser un de l’autre (solubilité maximale)
Quand pH=pI, la protéine est neutre et les AA vont rester ensemble pour former la protéine (solubilité minimale)
Quand pH>pI les AA sont chargés négativement et tous ses AA vont se repousser un de l’autre (solubilité maximale)

Question 7

c’est quoi le salting in

Answer 7

augmentation de la solubilité en ajoutant des sels à faible concentration en masquant les interactions charge-charge entre les molécules des protéines

Question 8

c’est quoi le salting out

Answer 8

diminution de la solubilité en ajoutant des sels à forte concentration par effet de competition pour les molécules d’eau autour des molécules de protéines. (favorise agregation et précipitation)

Question 9

c’est quoi les 4 méthodes de précipitation protéique

Answer 9

1) sels
2) solvants organiques
3) polymères
4) autres (tannins, AGà courte chaine, anticorps, lectine)

Question 10

c’est quoi les 6 caractéristiques du sulfate d’ammonium pour son utilisation dans une purification protéique

Answer 10

1) [] élevées inhibent croissance bactérienne+gardent protéine à l’état natif
2) excellente solubilité aqueuse
3) faible densité des solutions saturées permet une centrifugation aisée
4) faible chaleur de solubilisation minimise les risques de dénaturation
5) ces sont des ions stabilisateurs qui favorisent la précipitation protéique
6) solution légèrement acide (pH 5,0-6,0)

Question 11

c’est quoi la série de Hofmeister en général

Answer 11

une série d’ions provenant des sels qui sont catégorisés d’après leur capacité de salting in et salting out

Question 12

Comment les ions sont catégorisés pour la série de Hofmeister

Answer 12

les ions à gauce favorisent la précipitation à l’état natif (salting out), tandis que les ions à droite favorisent la dénaturation protéique suivie d’une précipitation (salting in)

Question 13

Justifie la séléction du sulfate d’ammonium à partir de la série de Hofmeister pour la purification protéique

Answer 13

Parce que les ions de sulfate de d’ammonium sont situés à gauche et ils sont stabilisateurs et priorisent la forme native de la protéine lors de sa précipitation (favorise salting out)

Question 14

4 types d’interactions moléculaires de la série de Hofmeister

Answer 14

1) ion salin-eau
2) ion salin-protéine
3) eau-protéine
4) ion salin-ion salin

Question 15

c’est quoi un ion cosmotrope

Answer 15

petits ions très hydratés qui lient les résidus chargés des protéines par interactions électrostatiques et que l’eau est relativement ordonnée autour de l’ion

Question 16

c’est quoi une chaotrope

Answer 16

grands ions peu hydraté et qui interagit avec les groupes non polaires de la protéine et que l’eau est peu ordonnée autour de l’ion

Question 17

Lequel est un ion stabilisateur et lequel est un ion dénaturant entre le cosmotrope et le chaotrope

Answer 17

chaotrope est un ion dénaturant et le cosmotrope est un ion stabilisateur

Question 18

c’est quoi l’influence des solvants organiques sur la solubilité des protéines

Answer 18

ils diminuent l’activité de l’eau ET dénaturent partiellement la protéine pour la précipiter