Séance E-lyophilisation

Question 1

pourquoi c’est important d’avoir une stratégie de stockage appropriée pour une protéine

Answer 1

pour stabiliser la protéine et éviter la dénaturation

Question 2

c’est quoi les 4 paramètres dénaturants lors du stockage

Answer 2

1) altération des conditions de la solution protéique
2) perte de cofacteur essentiel
3) présence des protéases, oxygène ou métaux lourds
4) changement des conditions physiques de congélation

Question 3

c’est quoi un exemple de réaction chimique qui inactive la stabilité protéique

Answer 3

oxydation par l’oxygène qui forme des ponts disulfure et l’agrégation protéique

Question 4

pourquoi la concentration de la protéine est importante pour son stockage

Answer 4

car les protéines à faibles [] sont moins stables

Question 5

c’est quoi la concentration minimale pour le stockage d’une protéine

Answer 5

1mg/mL

Question 6

4 agents stabilisateurs

Answer 6

sucres, sels, polymères et acides aminés

Question 7

mécanisme d’Action pour le sucre comme agent stabilisateur

Answer 7

stabilisateur osmolytique-stabilise couronne d’hydratation et protège contre agrégation

Question 8

mécanisme d’action pour les acides aminés comme agent stabilisateur

Answer 8

stabilisateur osmolytique-stabilise couronne d’hydratation et protège contre agrégation

Question 9

mécanisme d’action pour les polymères comme agents stabilisateurs

Answer 9

Stabilisateur osmolytique : augmente viscosité du solvant et
diminue agrégation protéique

Question 10

mécanisme d’action des sels comme agent stabilisateur

Answer 10

masque les charges entre molécules de protéines

Question 11

méthode de stockage pour 24h

Answer 11

4°C

Question 12

méthode de stockage quand >24h

Answer 12

4°C+filtration/ajout d’agent antibactérien

Question 13

méthode de stockage quand plus qu’une semaine

Answer 13

congélation rapide avec azote liquide, aliquotage et ajout d’agents stabilisateurs (glycérol)

Question 14

méthode de stockage pour plusieurs mois

Answer 14

-20°C+glycerol

Question 15

Méthode de stockage pour des années

Answer 15

-70°C+glycérol(facultatif)

Question 16

c’est quoi la lyophilisation

Answer 16

processus stabilisateur qui congele la substance, réduit le solvant par sublimation et réduit le solvant par désorption

Question 17

c’est quoi les 4 étapes de la lyophilisation

Answer 17

1) congélation-avec azote liquide
2) vide/séchage primaire-sublimation du solvant
3)vide/séchage secondaire-chaleur appliquée pour accelerer sublimation
4)condensation-solvant sous forme de vapeur éliminé

Question 18

4 avantages de la lyophilisation

Answer 18

-stérilité maintenue
-produit lyophilisé peut être conservé à T°C douces
-poudre obtenue est facile à resolubiliser
-élimination d’eau à basse temp

Question 19

4 inconvenients de la lyophilisation

Answer 19

-plusieurs molécules biologiques peuvent être inactivées par le séchage à froid
-processus long
-oxydation possible du produit
-Appareillage couteux