Proteinanalytik: Verfahren Flashcards
Was ist die Chromatographie?
In welche Phasen kann sie unterteilt werden?
Was?
Die Auftrennung eines Stoffgemischs durch unterschiedliche Verteilung seiner Einzelbestandteile
- Stationäre Phase
- Mobile Phase
- Retention
Was ist die Proteinfällung?
- Kann zur Reinigung von Proteinen von Salzen, Lipiden, etc. erfolgen
- als präparatives Verfahren, bei denen diese Substanzen stören würden
Was ist die Isoelektrische Fokussierung?
Die Isoelektrische Fokussierung trennt Proteine in einem elektrischen Feld nach ihrem IEP auf.
Welche Chromatographie-Verfahren gibt es?
- Gelfiltration/-chromatographie:
Trennung von Substanzen nach ihrer Molekülgröße - Ionenaustauschchromatographie:
Trennung von Substanzen nach ihrer Ladung - Affinitätschromatographie:
Trennung von Substanzen nach spezifischen Bindungsaffinitäten - HPLC (high performance liquid chromatography):
Säulenchromatographisches Hochdurchsatzverfahren
Was ist das Bindungspartner-Prinzip in der Affinitätschromatographie?
Der stationären Phase werden spezifische Bindungspartner kovalent angeheftet:
- Antikörper-Antigen
- DNA-Transkriptionsfaktor
- Enzym-Substrat
Welche Elektrophorese-Verfahren gibt es?
- Serumelektrophorese
- Gelelektrophorese
- Native-PAGE
- SDS-PAGE
- 2D-Elektrophorese - Kapillarelektrophorese
Was ist das Prinzip der Elektrophorese?
- Wanderung von geladenen Partikeln in einem elektrischen Feld
- Kathode (negativer Pol)
- Anode (positiver Pol)
Wie unterscheidet sich die Native PAGE von der SDS-PAGE?
- Proteine bleiben in ihrer nativen Konformation, werden nicht denaturiert
- Auftrennung nach Isoelektrischem Punkt, in verschiedenen Puffersystemen
- Auftrennung nach Ladung, Größe, Konformation
- Wofür steht SDS?
- Wofür steht PAGE?
- Sodium dodecyl sulfat
- Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Was sind die Funktionen von SDS?
- Anionisches Detergenz zur Maskierung der Oberflächenladungen der Komponenten des Trenngemischs
- Denaturiert Proteine durch Wechselwirkung mit deren hydrophoben Bereichen
- Solubilisieren
Durch welche Reaktion entsteht Polyacrylamid?
Nenne den dazugehörigen Katalysator!
- radikalische Polymerisierung
- Tetra methyl ethylen diamin (=TEMED)
Welche Ladung tragen SDS-Proteinmicellen?
Zu welchem Pol wandern diese Proteine (Anode, Kathode)?
- Negative Oberflächenladung
- zur Anode (hier pos. geladen)
Nenne die Verbindungen aus denen Polyacrylamid hergestellt wird!
- Acrylamid
- N,N’-Methylen-bisacrylamid
- Tetra methyl ethylen diamin (=TEMED)
- Ammonium peroxo disulfat (= APS)
Was sind die Funktionen von β-Mercaptoethanol und Dithiothreitol (DTT)?
- Reduktionsmittel
- Spaltung von Disulfidbrücken
Was ist die Stationäre Phase in der Chromatographie?
Unbewegliche Phase,
in die Substanzen eines Substanzgemischs abh. von ihrer Größe eindringen
und die mit einzelnen Substanzen Wechselwirkungen eingehen kann
