Photometrische Metabolitbestimmung Flashcards
Wozu dient die Photometrie und wie funktioniert sie?
- Optisches Messverfahren zum qualitativen und quantitativen Nachweis von Substanzen
- misst die Absorption
Was beschreibt das Lambert-Beer’sche Gesetz?
Beschreibt die Verkleinerung der Lichtintensität durch Extinktion
E = c * ε * d = - log (I1 / I0)
E: Extinktion
c: Konzentration [mol/L]
ε: dekadischer Extinktionskoeffizient [L·mol-1·cm-1]
d: Schichtdicke [m]
Wie berechnet man die Transmission?
Wie berechnet man die Absorption?
Wie stehen diese Größen im Zusammenhang?
D = I1 / I0
A = I2 / I0
A + D = 1
Aus was bestehen organische Farbstoffmoleküle?
Bestehen aus einem Chromophor:
- Kohlenstoffgerüst
- mit konjugierten Doppelbindungen
- und geeigneten Endgruppen
Wirksamsten Endgruppen: Kombinationen aus
- Auxochromen (e- Donatoren)
- und Antiauxochromen (e- Akzeptoren)
Welche Aminosäuren können bei UV-Wellenlängen (280nm) gemessen werden?
- Phenylalanin
- Tyrosin
- Tryptophan
Aminosäuren mit aromatischen Seitenketten
Zeichne die Purin- und die Pyrimidinbasen!
Purin: Adenin, Guanin
Pyrimidin: Thymin, Cytosin
Woraus besteht ein Nucleotid?
- Base
- Pentose
- Phosphatrest
Woraus besteht eine Aminosäure?
- Aminogruppe
- Carboxylgruppe
- variable Seitenkette
Welchen Stoff nimmt man zur indirekten Färbung von Substanzen (Proteinen) in der Biuret-Reaktion?
CuSO4 (blau)
Welchen Stoff nimmt man zur indirekten Färbung von Substanzen (Proteinen) in der Bradford-Reaktion?
Für welche Aminosäuren ist diese Messung geeignet?
Coomassie Brilliant Blau (Bradford Reagenz)
Für Aminosäuren mit pos. geladenen Seitenketten:
1. Lysin
2. Argnin
3. Histidin
Gebe die chemischen Reaktionen der chromogenen Variante zur indirekten Messung von Substanzen am Bsp. von Acetylcholin wieder!
Acetylthiocholin + H2O [Acetylcholinesterase]–> Acetat + Thiocholin
Thiocholin + DTNB (Ellmann’s Reagenz) –> Dithiocholinnitrobenzoat + TNB (Farbstoff)
Gebe die chemischen Reaktionen der Variante nach Warburg zur indirekten Messung von Substanzen am Bsp. von NAD+/NADH+H+ wieder!
Leberdiagnostik (zur Bestimmung von Herzinfarkten):
- Pyruvat + NADH + H+ [LDH]–> Lactat + NAD+
- Alanin + Oxoglutarat [ALAT]–> Pyruvat + Glutamat
Nachweisreaktion: Pyruvat + NADH + H+ [LDH]–> Lactat + NAD+ - Aspartat + Oxoglutarat [ASAT]–> Glutamat + Oxalacetat
Nachweisreaktion: Oxalatacetat + NADH + H+ [MDH]–> Malat + NAD+
Wie ist Glucogen aufgebaut?
α-D-Glucose
- Monomere α-1,4-glykosidisch verknüpft
- Ketten über α-1,6-glykosidische Bindungen verzweigt
Glucoseoxidase-Methoden:
Gebe die chemischen Reaktionen der optischen Messmethode (GOD) wieder!
Glucose + H2O + O2 [GOD]–> Gluconat + H2O2
Nachweisreaktion: H2O2 + ABTS(red) [POD] –> H2O + ABTS(ox)
POD: Meerrettich-Peroxidase
Glucoseoxidase-Methoden:
Gebe die chemischen Reaktionen der Amperometrische Messmethode wieder!
Glucose + H2O + O2 [GOD]–> Gluconat + H2O2
Platinanode: H2O2 –> 2H+ + O2 + 2e-
Silberkathode: 4H+ + O2 + 4e- –> 2H2O
Glucoseoxidase-Methoden:
Gebe die chemischen Reaktionen der Hexokinase-Methode wieder!
Glucose + ATP [Hexokinase]–> Glukose-6-Phosphat + ADP
Nachweisreaktion: Glukose-6-Phosphat + NADP+ [G6P-Dehydrogenase] –> Glyconat-6-P + NADPH/H+
Wie groß ist die Wellenlänge des sichtbaren Lichts?
400 bis 800 nm
Welche Faktoren bestimmen die Wahl der Wellenlänge, bei der die Konzentration
einer Substanz bestimmt werden soll?
- Lsg soll Absorptionsmaximum besitzen (komplementäre Farbe wählen)
- keine andere der im Reaktionsansatz enthaltenen Substanzen darf bei dieser
Wellenlänge absorbieren - Photometer muss eine Messung in diesem Wellenlängenbereich erlauben. (Eigenschaft der Lichtquelle)
Bei welchen Wellenlängen absorbieren im UV-Bereich Proteine und Nukleinsäuren?
Proteine: 280nm
Nukleinsäuren: 260nm
Welche Lichtwellenlänge verwendet man bei der Pulsoxymetrie und weshalb?
Welches Blut wird gemessen?
Lichtwellenlänge: Infrarotlicht (940nm)
Gründe:
- Absorptionsmaximum gesucht
- durchdringt das Gewebe
Welches Blut?
- oxygeniertes (arterielles)
Warum nimmt man NAD+ und NADH/H+ als Nachweis in Absorptionsspektren?
- NAD+ (NADP+): 1 Absorptionsmaximum
- NADH/H+ (NADPH/H+): 2 Absorptionsmaxima
Bei welcher Wellenlänge hat NADH ein Absorptionsmaximum, welches bei NAD+ nicht vorhanden ist?
340nm
