PCR mutagénico

Question 1

Mutación

Answer 1

cambio permanente en la secuencia de DNA que se hereda y puede ser causada por compuestos químicos, radiación, virus o errores en la replicación de DNA

Question 2

Mutagénesis

Answer 2

generar una mutación en el DNA

para probar la función de un gen y sus productos (proteínas)

Question 3

tipos de mutagénesis

Answer 3

azar:
- mutar cualquier región del DNA, muchos cambios no controlados

sitio dirigida

Question 4

PCR mutagénico

Answer 4

técnica para crear mutaciones en el DNA en una ubicación específica por medio de PCR

Question 5

Características de PCR mutagénica

Answer 5

se realiza por medio de oligonucleótidos o primers que tienen la mutación

también llamada site directed mutagenesis

permite cambiar residuos de aminoácidos por otros al cambiar la secuencia de los codones que lo codifican en la secuencia del gen

Question 6

requerimientos para hacer mutagénesis sitio dirigida:

Answer 6

1. conocer secuencia del gen de interés
2. diseñar primers que sean complementarios al gen de interés y que tengan el o los nucleótidos que queremos cambiar (mutación)

Question 7

Quickchange

Question 8

diseño de primers para quickchange

Answer 8

oligonucleótido contiene la mutación

Question 9

¿Qué tipo de cambios en los residuos de aminoácidos pueden lograrse con la mutagénesis dirigida para modificar la función de una proteína?

Answer 9

se pueden realizar sustituciones de aminoácidos, alterando residuos catalíticos, sitios de unión, y elementos regulatorios en la proteína

Question 10

Escaneo de alaninas

Answer 10

se reemplazan aminoácidos específicos por alanina (estructura simple) se pueden identificar los aminoácidos clave para la función o estructura de la proteína sin agregar complejidad estructural​

Question 11

Propósito de insertar un sitio de restricción

Answer 11

verifica la presencia de la mutación, facilitando la clonación

Question 12

¿Qué es BamH1?

Answer 12

sitio de restricción que se inserta para permitir la clonación del fragmento en vectores que contienen un sitio compatible con esta enzima

Question 13

Características del gen retinoblastoma (Rb)

Answer 13

regulación del ciclo celular

tiene potencial como supresor tumoral

Question 14

Ejemplo de enzima de restricción

Answer 14

Hpal

Question 15

Tipos de mutaciones que se pueden hacer con PCR mutagénico

Answer 15

Mutuación puntual:
- cambio en un solo nucleótido

Deleción:
- se pierde uno o varios nucleótidos

Inserción:
- adición de uno o varios nucleótidos

Dirigida:
- por PCR mutagénico

Question 16

Tipos de mutaciones en relación al código genético

Answer 16

silenciosa (mismo aminoácido silente)

con sentido (cambio de aa)

sin sentido (codón de stop)

Question 17

Pasos de clonación de la región promotora de Rb 1

Answer 17

1. PCR amplificar promotor
2. clonar: insertar el promotor Rb en un plásmido
3. restricción del plásmido para verificar que el inserto esté presente
4. secuenciar