Clonación

Question 1

¿qué es clonación molecular?

Answer 1

replicar un fragmento específico de DNA para estudiar genes, producir proteínas o realizar modificaciones genéticas

Question 2

¿para qué se utiliza la clonación?

Answer 2

insertar DNA recombinante en un vector (plásmido) que puede replicarse dentro de un organismo huésped

Question 3

Pasos para la clonación

Answer 3

1. crear vector
2. preparar inserto (fragmento de DNA que quiero clonar)
3. ligación (inserto + vector = DNA recombinante):
   la ligasa sella los extremos cohesivos generados por las enzimas de restricción
4. transformación:
   por choque de calor, el DNA recombinante se introduce a un huésped
5. selección de colonias

Question 4

Preparación del vector

Answer 4

se utilizan sitios múltiples de clonación (MCS) en los vectores para facilitar el uso de varias enzimas de restricción y controlar la dirección de inserción del inserto

Question 5

Preparación del DNA

Answer 5

por PCR o digestión enzimática

se purifica para eliminar enzimas y sales

Question 6

digestión enzimática

Answer 6

proceso en el que se emplean enzimas de restricción para cortar el DNA en secuencias específicas

Question 7

métodos de purificación de DNA

Answer 7

por columnas | pasos:
- lisis o recolección de la muestra
- unión del DNA a la sílica en la columna
- lavado
- elución

extracción con fenol-cloroformo | pasos:
- muestra se mezcla con fenol-cloroformo y se centrifuga
- capa acuosa (DNA), capa orgánica (contaminantes)
- se rescata el DNA y se precipita con etanol o isopropanol