Modèle de souris dans le cancer - 8 (partie 2) Flashcards
Quelles sont les 4 classes de modèles de souris?
- Tumeurs spontanées
- Tumeurs induites
- Souris transgéniques
- Greffes de cellules cancéreuses
Quelles sont les principales causes des tumeurs spontanées?
- Virus
- Diète
- Hormones
- Hérédité
Quelle est l’utilité des modèles de tumeurs spontanées?
Le développement tumoral est très similaire à celui chez l’humain
Quelles sont les limites des modèles de tumeurs spontanées?
- Beaucoup de souris nécessaires
- Expériences longues
- Hétérogénéité entre les animaux
- Difficile de prévoir et d’avoir une cohorte synchronisée
Comment les tumeurs sont-elles induites?
Avec des carcinogènes qui induisent des tumeurs dans différents organes
- Uréthane, NNK, radiations, etc.
Quels sont les avantages des modèles de tumeur induite?
- Méthodes efficaces et étendues pour favoriser le développement de tumeurs
- Temps assez court
- Haute reproductibilité
Quels sont les désavantages des modèles de tumeurs induites?
- Taux élevé de mortalité
- Localisation et nombre de lésions non uniforme
À quel modèle de souris cet énoncé fait référence?
Génération d’une souris exprimant la forme oncogénique de KRAS.
Modèle des souris transgéniques, on modifie son génome.
Quel modèle de souris permet de comprendre les voies de signalisation et l’évasion immunitaire des tumeurs?
Les souris transgéniques
Quels sont les désavantages des souris transgéniques?
- Long et coûts élevés
- Risque pour l’expérimentateur
Explique l’approche non ciblée pour produire une souris transgénique.
- Injection d’une construction d’ADN dans le pronucléus mâle de l’oocyte fertilisé
- Le transgène s’intègre de manière non spécifique dans le génome et toutes les cellules descendantes vont porter ce transgène
- Implantation dans une mère porteuse
- Les nouveaux-nés devraient posséder le transgène
- Observation du phénotype pour trouver le rôle du gène d’intérêt
Nomme des conséquences possibles de l’approche non ciblée
- Surexpression extrême de la protéine (pas de contrôle sur le nombre de copies produites)
- Mutations létales ou effets indépendants de la fonction du transgène, car il s’est inséré dans une région critique et essentielle
- Inactivation du transgène parce qu’il s’est intégré dans une région silenced
Explique l’approche de ciblage génétique pour les souris transgéniques
- Construction d’une molécule d’ADN avec le transgène d’intérêt
- Introduction de cette molécules dans des cellules souches embryonnaires (ES)
- Recombinaison et intégration de l’ADN à un site précis dans le génome
- Les cellules ES sont injectées dans un blastocyste
- Le blastocyste est implanté dans une mère porteuse
- Les nouveaux-nés chimériques sont croisés pour déterminer lesquels ont le transgène dans leurs cellules germinales (modification transmise aux descendants)
Nomme un avantage du ciblage génétique par rapport à l’approche non ciblée
Évite l’intégration du transgène dans des régions essentielles du génome
Quelles sont les deux méthodes d’introduction de l’ADN dans les cellules ES?
- Recombinaison homologue: réussi
- Insertion aléatoire: indésirable
Comments les cellules modifiées avec recombinaison sont-elles sélectionnées?
Elles ne sont pas sensibles au FIAU, mais celles dont l’ADN a été introduit de manière aléatoire oui (HSV-tk).
Il suffit de traiter les cellules au FIAU et G418.
- G418 permet de conserver juste les cellules qui ont le transgène (aléatoire ou par recombinaison)
En utilisant CRISPR-Cas9, comment peut-on introduire des mutations?
En utilisant le mécanisme NHEJ. Il n’utilisa pas d’ADN gabarit, donc il créer une insertion ou une délétion.
Quelle sont les différences entre les souris KO et les souris cKO?
- KO: gène ciblé dans tous les tissus et à toutes les étapes du développement. On supprime un gène par RH ou CRISPR-Cas9
- cKO: gène ciblé dans des tissus spécifiques et à des stades précis du développement. Produites grâce à Cre-Lox.
Comment on crée une souris cKO?
Croisement d’une souris ayant la recombinase Cre sous le contrôle d’un promoteur tissus spécifique avec une souris ayant le gène d’intérêt floxé par des sites LoxP.
- Descendance: délétion du gène floxé, car la recombinase a reconnu les sites LoxP
Quel modèle de souris permet l’étude de plusieurs types de cancer?
Le modèle de greffes.
Quelles sont les limites des souris greffées?
- Les souris doivent être immunodéficientes, ce qui limite l’étude de la contribution immunitaire à la progression tumorale
- Le microenvironnement de la tumeur n’est pas le même que chez l’humain
Quelle est la différence entre une allogreffe et une xénogreffe?
- Allogreffe: Donneur et receveur de la même espèce
- Xénogreffe: Donneur et receveur d’espèces différentes
Si on veut faire de la médecine personnalisée (criblage), quel type de xénogreffe devrait-on choisir?
PDX (patient derived xenograft)
- On transplante des tissus provenants directement des tumeurs/métastases du patient. Permet aussi de conserver les interactions et les composantes de la tumeur.
Quelle est la différence entre les xénogreffes hétérotopiques VS orthotopiques?
- Hétérotopiques: Implante des cellules humaines cancéreuses dans un organe différent de celui qui héberge la tumeur primaire. Injection sous cutanée.
- Orthotopique: implantation dans le même organe que la tumeur primaire. (glande mammaire à glande mammaire)
Quel modèle de xénogreffe (hétéro ou ortho) pour chaque énoncé:
a) Observation de la progression de la tumeur, de sa prolifération
b) Étude des interactions dans le microenvironnement et du processus de métastases
a) Hétérotopique
b) Orthotopique
Quel modèle de xénogreffe permet d’observer la capacité des cellules à former des métastases sans avoir besoin de produire une tumeur primaire dans la souris?
L’injection dans la veine de la queue
Quels sont les désavantages de l’injection dans la veine de la queue?
- Progression tumorale incomplète
- Site de métastase principal est toujours le poumon (car dans le sang)
