Méthodes et techniques Flashcards

1
Q

méthodes analytiques

quelle propriété utilisée pour: spectrophotométrie

A

propriété d’absorption de la lumière

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Q

méthodes analytiques

quelle propriété utilisée pour: spectrométrie d’absorption atomique?

A

absorption d’ondes

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3
Q

méthodes analytiques

quelle propriété utilisée pour: spectrométrie de masse

A

rapport masse / charge

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4
Q

méthodes analytiques

quelle propriété utilisée pour: enzymologie?

A

spécificité substrat vis à vis des enzymes

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5
Q

méthodes analytiques

quelle propriété utilisée pour: immunodosage

A

propriété de reco ag ac

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6
Q

les méthodes analytiques sont toujours précédée par une méthode séparative

vrai/faux

A

faux, précédée ou non

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7
Q

méthodes séparative

quelle propriété physicochimique exploitée par: centrifugation

A

densité & forme

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8
Q

méthodes séparative

quelle propriété physicochimique exploitée par: extraction

A

hydrophobicité / hydrophilicité

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9
Q

méthodes séparative

quelle propriété physicochimique exploitée par: méthodes chromatographiques

A
  • hydrophobicité/hydrophilicité
  • adsorption
  • volatilité
  • taille
  • charge
  • affinité
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10
Q

méthodes séparative

quelle propriété physicochimique exploitée par: électrophorèses

A

charge / forme / pm

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11
Q

la centrifugation permet de ?

A

séparer des constituants de taille et de masse variable

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12
Q

principe de la séparation par centrifugation?

A

applique force centrifuge en faisant tourner l’échantillon = accélère le phénomène de sédimentation = les molécules sont entrainées vers le fond du tube ou remontent à la surface

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13
Q

sur une centrifugeuse on règle..?

A
  • temps de centrifugation
  • vitesse (rpm)
  • température : évite échauffement due à la rotation
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14
Q

coefficient de sédimentation?

A

exprimé en svedberg qui correspond à 10-13s (vitesse/accélération): il est mesuré expérimentalement

IL N’EST PAS ADDITIF

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15
Q

Une particule donnée a une vitesse spécifique de sédimentation qui
dépend de …

A

sa masse, volume, taille et forme (forces de frottement liées au déplacement)

mais également densité du solvant

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16
Q

extraction, permet de? quels types?

A

enrichir la solution en molécule recherchée

  • liquide liquide : 2 phases non miscibles
  • sur phase solide (colonne c18; silices)
17
Q

méthodes chromatographiques: principe?

A

une phase stationnaire + phase mobile

interaction différentes entre les molécules à séparer et les 2 phases

    • les molécules ont des affinités pour la phase stationnaire, plus elles sont retardées
    • les molécules ont des affinités pour la phase mobile, plus elles sont éluées vite
18
Q

chromatographie: affinité en fonction de plusieurs critères:

  • hydrophobes hydrophiles: ?
  • propriétés ioniques?
  • encombrement et taille?
  • interaction spécifique avec un ligand?
A
  • hydrophobes hydrophiles: chromatographie sur couche mince / HPLC / CPG…
  • propriétés ioniques: chromatographie échangeuse d’ions
  • encombrement et taille: chromato d’exlusion
  • interaction spécifique avec un ligand: chromato d’affinité
19
Q

HPLC:

  • phase stationnaire?
  • phase mobile?

les molécules sont séparées en fonction de ?

détecteur associé?

A
  • phase stationnaire: colonne remplie de particules de faible diamètre (5µm) hydrophile ou hydrophobe
  • phase mobile: liquide (hydrophobe ou hydrophile)

séparée en fonction de leur polarité

détecteur: spectrophotomètre; électrochimie, fluorimètre ou spectro de masse

20
Q

HPLC: avantages?

A

très grande sensibilité (ng), grand pouvoir séparateur ++ reproductible

petites quantités de matériel biologiques : µg

assez rapide: min à h

21
Q

CPG:

  • phase stationnaire: ?
  • phase mobile: ?
  • molécules séparées en fonction de?
  • préparation de l’échantillon?
  • détecteurs?
A
  • phase stationnaire: solide ou liquide visqueux non volatil fixé sur un support inerte (colonne)
  • phase mobile: gaz inerte (azote, hélium)
  • molécules séparées en fonction de volatilité et polarité
  • préparation de l’échantillon: injectés et vaporisés en haut de la colonne à t° élevé
    • détecteurs: ionisation de flamme ou spectro de masse…
      *
22
Q

CPG: avantages/inconvénients?

A

sensibles (ng), rapide (qq min à H), précise

MAIS composés à séparer doivent être volatils à température du chromatographe sinon doivent etre transformé en composés volatils stables

acide gras: non volatils même à t élevée

23
Q

chromato d’exclusion = tamisage moléculaire, gel filtration

  • phase stationnaire?
  • phase mobile?
  • molécules séparées en fonction de ?
A
  • phase stationnaire: solide (gel) poreux
  • phase mobile: liquide
  • molécules séparées en fonction de : leur taille
24
Q

chromatographie d’affinité

  • phase stationnaire?
  • phase mobile?
  • molécules sont séparées par affinité = intéractions spé entre 2 molécules
A
  • phase stationnaire: support inerte sur lequel est branché un effecteur qui présente affinité biologique avec un soluté de l’échantillon
  • phase mobile: liquide

l’un des deux membres du couple est fixe et retient le 2e a partir d’un mélange

25
Q

électrophorèse: principe?

A

technique de séparation de molécules chargées par passage à travers une matrice (maillage) sous l’effet d’un courant électrique continu

séparat° f( taille de la forme et de la charge)

UNIQUEMENT POUR MOLECULES HYDROPHILES (PAS LES LIPIDES)

26
Q

électrophorèse en cdt° non dénaturantes: séparation des molécules dans leur état natif en fonction de?

A
  • leur charge (acides nucléiques toujours - / prot et AA + ou -)
  • masse moléculaire (choix du support)
  • forme (molécules glboulaire +rapide)
27
Q

isoélectrofocalisation?

A
  • variante de l’electrophorese non denaturante
  • ph du gel varie selon un gradient entre 2 électrodes
  • fur et à mesure de sa migration dans le gel, molécule soumise à un ph différent
  • qd atteint phi, neutre, arrêt de la migration
28
Q

électroph en condition dénaturantes:

  • on dénature préalablement les protéines=…?
  • agents dénaturants?
A
  • dissociation structures 3aire et 4aire des protéines (disso dimères, perte forme globale, hélices alpha souvent conservées
  • agents dénaturants: SDS (sodium dodécyl sulfate), urée, B-mercaptoéthanol (coupe SS)
29
Q

SDS PAGE

A
  • électro en cdt dénaturante
  • extrait prot traités par sds: se fixe sur les prot, donnent charges négatives et forme de batonnet
  • prot ne migrent que en fonction de leur poids moléculaire