Manipulación de genes (Blots, ELISA and more) Flashcards
ELISA
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
Interacciones antígeno-anticuerpo (de origen monoclonal)
ELISA directa
Pones antígeno y luego anticuerpo primario
ELISA indirecta
Se pone antígeno, tenemos anticuerpo primario y después ponemos anticuerpo secundario
ELISA sandwich directo
Anticuerpo, antígeno y un anticuerpo primario
ELISA sandwich indirecto
Tenemos anticuerpo, antígeno, anticuerpo primario y después anticuerpo secundario
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia de RNA específica en una muestra de sangre o tejido
Northern Blot
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de DNA en una muestra de sangre o tejido
Southern Blot
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido
Western Blot
Función de ELISA
Detección de antígenos o anticuerpos
Es cuantificable y es rápida
Western Blot
Cualitativo y toma mucho tiempo, solo PROTEÍNAS
PCR función
Para amplificar o identificar segmentos de DNA
PCR punto final
Es cualitativa -> nos dice si está o no está
PCR tiempo real
Nos sirve para cuantificar, como carga viral o bacteriana cuánto tiene
Nos sirve para identificar polimorfismos usando enzimas de restricción
PCR-RFLP
PCR multiplex
Para dos o más genes
SSO (secuence specific oligonucleotide)
Secuencia de oligonucleótidos para ver compatibilidad de HLA (para trasplantes)
¿Cuál es el estudio má sensible para realizar el diagnóstico de COVID?
RT-PCR pues me sirve para detección de virus
PCR vs Southern
PCR es más sensible al servirnos para amplificar lo usamos cuando hay poca muestra
Southern requiere mayor cantidad de DNA y es más lento, más fácil que el multiplex
Microarreglos qué es?
¿Y para qué sirve?
Para la expresión de muchos genes a la vez o a gran escala
-> sirve para investigación y para comparar a pacientes sanos vs patológico (Alzheimer)
-> para investigar la respuesta genética de células tumorales ante un fármaco
-> a través de positos ponemos sondas de mutaciones y al poner DNA del paciente al complementarse sabemos que tipo de cáncer va a tener
Secuencias específica de nt de un gen
Sonda
Citometría de flujo qué es?
Es para poblaciones o propiedades celulares (macrófagos tipo I, II, LB, LT, etc)
-> Nos dice características de esas células (tamaño, gránulos)
Como en fila india
FISH qué es?
Inmunofluorescencia -> se marca una sonda y se introduce en el DNA de la muestra y a la hora de condensarse los cromosomas se ve la sonda incluida -> podemos ver si tiene mutaciones de cromosoma
-> se puede ver bajo microscopio para detectar mutaciones grandes de los cromosomas.
Análisis de propiedades físicas y químicas de las células mientras pasan en una corriente por un láser
Citometría de flujo
Uso de pequeñas cantidades de material genético para analizar la expresión de múltiples genes a la vez
Microarreglos
Captura el antígeno entre dos anticuerpos, uno adherido al pozo y otro que se utiliza para detectar el antígeno
ELISA tipo sándwich
Utiliza un anticuerpo primario sin marcar y un anticuerpo secundario conjugado con una enzima
ELISA indirecto
Permite la amplificación de múltiples secuencias objetivo en una PCR
PCR múltiplex
Amplifica secuencias específicas de ADN
PCR estándar
Detección de antígenos usando anticuerpos marcados directamente con una enzima
ELISA directo
