Manipulación de genes

Question 1

Las modificaciones de los genes son….

Answer 1

• Al Azar
• Variantes
• Ectópicas
• Inesperadas

Question 2

¿Quiénes dan soluciones para modificar el genoma eucariótico?

Answer 2

La especie procarionte

Question 3

Define que es la microinyección de DNA en prónucleos en los huevos fertilizados

Answer 3

Se inyecta el gen de interés en el prónucleo masculino de un animal donado.
Se inserta antes de la primera división celular de tal modo que todas las células del animal contienen el gen

Question 4

Pasos para microinyección de DNA en prónucleos

Answer 4

1. Identificar el gen de interés
2. Inserta el gen en el vector adecuado
3. Microinyección de DNA dentro del pronúcleo masc de un huevo.
4. Implantación del huevo microinyectado en un madre alquiler
5. Desarrollo de embrión hasta nacimiento
6. Ver si se incorporo el gen (expresión)

Question 5

¿Dónde se integrará el nuevo gen?

Answer 5

Donde quiera, el promotor elegido ayuda expresar el nuevo gen

Question 6

¿Para qué se usa la microinyección en prónucleo?

Answer 6

Crear animales transgénicos
* Que ayuden a estudiar un gen en una patología
* Hacer transplantes

Question 7

Problemas de la microinyección de DNA en prónucleos

Answer 7

• Sobreviven pocos huevos
• El gen se inserta al azar en los cromosomas
• No todas las células del animal reciben el gen
• El gen no se expresa lo suficiente

Question 8

Define la modificación genética en células madre embriónicas

Answer 8

Las células madre embriónicas se aislan y se le pone vector con DNA. Se escoge la que tenga el plásmido y se vuelve a poner en blastocisto.

Question 9

¿De dónde se obtienen las células madre embriónicas?

Answer 9

Del blastocito

Question 10

Pasos de la modificación génetica en las células madre embriónicas

Answer 10

1. Célulad madre se obtiene de blastocisto
2. Se mantienen las células en cultivo con factores que inhiben su diferenciación
3. Se manipulan con recombinación homóloga
4. Se reintroducen en blastocisto

Question 11

¿Qué produce la modificación genética en células madre embrionarias?

Answer 11

Descendencia con mosaicismo

Question 12

Clonación

Answer 12

Transferencia de núcleo a célula plasmática

Question 13

Describe la clonación

Answer 13

Se utiliza el núcleo de una célula somática y el óvulo sin núcleo. (en etapas G0_/G1).
Se inserta en un útero, empieza fusión y luego división celular hasta formar un embrión

Question 14

¿Por qué no funcionó la clonación en la oveja Dolly?

Answer 14

La célula estaba vieja con menor cantidad de telómeros.

Question 15

Crispr

Answer 15

Clustered interspace short palidromic repeats
Repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmennte interespaciadas

Question 16

Cas

Answer 16

Proteínas como endonucleasas asociadas a CRISPR

Question 17

CRISPR

Answer 17

Las secuencias repetitivas se encuentran en bacterias separados por espaciadores (de bacteriofagos)

Question 18

Proceso de generar CRISPR-CAS

Answer 18

• Pequeños fragmentos de DNA viral o plásmidos se incorporan al génoma bacteriano con muchas secuencias palindromicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas
• Se transcribe y genera un RNA no codificante, (pre-cRrna) que se procesa mediante proteínas Cas
• Se forma el crRNA maduro con Cas II
• Se forma cada complejo CASIII+ secuencia palindromica+gen fago
• Ensamble de proteína Cas y el crRNA dividido

Question 19

Pasos de formación CRISPR-CAS

Answer 19

• Enzimas de restricción de bacteria incorporan el plásmido o DNA viral en DNA cromosómico de bacteria
• CRISPR ahora sera secuencia FAGO+ secuencia palindrómica (repetidas veces)
• La estructura es RNA de unión, CAS y luego CRISPR
• Como esta estructura es DNA se transcribe
  *Se forma RNA de unión, RNA CAS y RNA CRIPSR
  *Esto se modifica fromando RNA de unión, proteínas CAS, y cortando CRISPR en pedazos de secuencia palindrómica-FAGO
  *Ahora RNA de unión une CAS con un pedazo CRISPR

Question 20

Función complejo CRISPR-CAS en bacterias

Answer 20

1. Fago mete su DNA viral
2. Cél tiene complejo CRISPR-CAS, con secuencias igual al DNA vírico
3. CAS actua com endonucleasa, ya que bacteria tiene info y no quiere volver a infectarse.
4. Se corta el nuevo DNA insertado

Question 21

Diferentes funciones de proteínas CAS

Answer 21

• Endonucleasas
• Unir a CRIPSR
• Muchas funciones
• Une DNA de fago a CRISPR

Question 22

Crispr-Cas9

Answer 22

Manera de manipular el genoma sin alterar la secuencia genética subyacente

Question 23

Función de Cas 9

Answer 23

No tiene función de endonucleasa
* Desaminar nucleótidos es decir en citocina a uracilo. Mutar gen para crear diferentes proteínas
* Activador o represor
* Expresar genes o promover la transcripción

Question 24

Aplicaciones CRISPR-CAS 9

Answer 24

• Silenciar ciertos genes
• Modificaciones en metabolitos secundarios
• Sobre expresar un gen para producir de mas un producto deseado como la insulina
• Etiquetar ciertos genes
• Regulación de ciertos genes por señales de estrés o trasducción

Question 25

Desventajas de CRISPR-CAS9

Answer 25

• Generar mutantes
  *

Question 26

¿Cómo localizar una secuencia en el gen?

Answer 26

Fluroforo

Question 27

Aplicaciones médicas CRISPR-CAS9

Answer 27

• Permitir el desarrollo de terapias génicas (modificar Gen dmd que codifica para distrofina y aliviar la atrofia de músculos proximales en la distrofia muscular de Duchenne)
• Terapia celular (modificar células ex vivo para introducirlas, enfermedad Parkinson, Huntington)
• Terapia células madres (inducir diferenciación como regenerar tejido miocárdico en cardiopatía isquémica)