Anticuerpos Diagnósticos Flashcards
¿Cuál es la barrera física del sistema inmune?
Piel y mucosas
Sistema inmune innato
Barreras físicas como piel mucosa, pH, vellosidades
¿Cómo es la respuesta del sistema inmune innato?
Rápida e inespecífica
Células destruyen todo rápido e inmediato
Sistema inmune adaptativo
Respuesta lenta y muy específica. Reconoce microorganismos y los mata
Células de la inmunidad innata
Mastocitos, fagocitos, epitelio, linfocitos NK, IL, células dendríticas, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, macrófagos
Células de la inmunidad adaptativa
Linfocitos B- céls plasmáticas
Linfocitos T - como efectores
Pasos para producir anticuerpos
- Linfocito B reconoce antígeno
- Se activa linfocito B
- Prolifera
- Se diferencia en células plasmáticas y otros tipos
- La célula plasmática produce anticuerpos
Composición anticuerpo
Se compone de:
* 2 cadenas pesadas (variable, puesta por linfocito B)
* 2 cadenas lígeras (constante)
Cada cadena pesada se une a la ligera mediante puente disulfuros.
¿Para qué el linfocito B pone una cadena pesada diferente?
Es específico a cada parte de un microorganismo
¿A dónde va 1 anticuerpo?
Detecta una porción específica del microorganismo como una fimbria, proteínas o membrana.
Anticuerpo diagnóstico
Ac en el que se modifica la parte variable para identificar lo que buscamos como una proteína.
Aplicaciones de Ac diagnósticos
- Identificar patógenos como VIH
- Medición de componentes de la sangre
- Examinar detalles microscópicos o de la arquitectura de un tejido.
- VIH- PCR- duda—–> ELISA
Verbos y áreas de aplicación de Ac s
Identificar, cuantificar, localizar
Microbiología, inmunología, hematología, patología
¿Qué mide ELISA?
Ensayo inmunoabosrbente ligado a enzimas
Interacciones anticuerpo-antígeno
¿Qué tipo de Ac se utiliza en ELISA?
Ac monoclonal, es decir un tipo de una sola célula plasmática
Elisa Directa Pasos
- Ag se inmoviliza en placa
- Se añade Ac primario marcado con una enzima que se unirá al Ag
- Se añade sustrato que reacciona con enzima y muestra señal
Función de Elisa directa
Detectar o cuantificar el antígeno de interés
Analizar la respuesta inmune contra un antígeno
Desventajas ELISA directa
Tiene menor sensibilidad
Mayor rudio de fondo; proteínas y Ag s se quedan en el fondo
ELISA indirecto pasos
- Ag se inmoviliza en placa
- Se añande Ac primario que se une a Ag
- Se añade Ac secundario con enzima que une a AC 1°
- Se añade sustrato que hace reaccionar la enzima y muestra señal
Función de ELISA indirecta
Detecta y/o cuantifica antígeno de interés
ELISA Sandwich Directo Pasos
- Ac se inmoviliza
- Añadir Ag
- Poner Ac secundario con enzima
- Sustrato que activa enzima
ELISA Tipo Sandwich indirecto pasos
- Ac de captura se inmoviliza
- Se añade Ag de interés
- Se añade Ac de detección que se une a Ag
- Se añande Ac secundario o 3° que se une a Ac de detección
- Se añade sustrato que activa señal
Detecta y/o cuantifica Ag
Describe con tus palabras cada tipo de ELISA
Función y ventaja ELISA tipo sandwich
Análisis de muestras complejas
Alta sensibilidad y especificidad
¿Qué demuestra la concentración de color en una ELISA?
Que tan presente está el antígeno
Citometría de flujo
Método cuantitativo que analiza células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión
Ejemplo de citometría de flujo
Leucemia tipos de linfocitos
¿Cómo se diferencian las células en el citómetro de flujo?
Clúster de diferenciación
Ac identifica proteínas en la superficie celular
Por ejemplo, cada molécula CD es específica a un linaje celular.
+ 400 marcadores celulares
Definición de citómetro de flujo
Técnica de análisis que permite identificar a diferentes poblaciones celulares simultáneamente
Pasos del citómetro de flujo
- *Las células deben estar en buffer de fosfatos (líquido)
2.Las células se alinean en fila india
3. Un sistema óptico de láseres y filtros iluminan las células
4. Sistema identifica tamaño y granularidad y proteínas que expresan (marcadores)
5. La señal luminosa se traduce a señales electrónicas
¿Qué determinan los filtros del citómetro de flujo?
Tamaño celular y grado de complejidad
al refractar luz se clasifican células
Citometro flujo función fluroforo
Detecta 18 colores es decir distintas proteínas.
¿Cómo se usan los Ac en el citómetro?
En la muestra se ponen Ac para cada célula. Los marcadores indican el pronóstico, como cuantos linfocitos T tienen.
Ejemplos de citometría de flujo
- Diagnóstico de leucemias línfomas
- Seguimiento de enfermedades como VIH
- Estudio de cáncer
- Cuantificación de concentraciones de moléculas solubles
- Medir eficacia de tratamientos inmunosupresores y antitumorales
* Diferenciar entre macrófago 1 y 2 (se usan en distintas situaciones)
*
La citometría de flujo permite diferenciar entre leucemia mieloide o linfoide
Si ya que identifica los receptores CD que son diferentes en cada leucemia
Southern Blot
Predesor de PCR
Técnica de lab que detecta una secuencia específica de ADN en una muestra de sangre o tejido (cualitativo)
Northern Blot
Técnica que detecta una secuencia de ARN específica en una muestra de sangre o tejido
Western Blot
Técnica que identifica una proteínas especifica en una muestra de sangre o tejido
Si utiliza Ac diagnósticos
Pasos southern blot
- Aislar ADN
- Enzimas de restricción (corta ADN en fragmentos)
- Electroforesis
- Desnaturaliza ADN
- Papel filtro de nitrocelulosa: fragmentos de ADN se transfieren del gel a la superficie de la membrana
- Hibridación: membrana se expone a una sonda de ADN con marcador. Si la sonda se une a membrana, entonces la secuencia de la sonda está presente en muestra.
Uso diagnóstico de Ac en infección viral
Ver respuesta de paciente a infección como respuesta inmune aguda o de memoria con IGs
