Hibridoma Flashcards
Estructura de anticuerpos
2 ligeras (variable, constante) y 2 pesadas (variable, constante)
¿En qué región de Ac se une el Ag?
En la parte variable
Anticuerpos policlonales
Producidos por más de una clona de linfoctios B (diferentes céls plasmáticas)
Función de Ac policlonales
Cada uno econoce un antígeno distinto o diferentes epítopes de un antígeno
Epítope
Parte de la macromolécula que se indentifica por el anticuerpo
¿Cómo se obtienen Anticuerpo policlonales?
Se obtiene de inmunizar un animal con el antígeno de intéres y purificar los anticuerpos que se producen
Anticuerpos monoclonales
Son anticuerpos producidos por una sola clona (1 célula plasmática) de linfocitos B
Reconocen un solo epítope de un mismo antígeno con misma afinidad
¿Cómo se produce anticuerpo monoclonal?
Se aisla clona de linfocitos B en el laboratorio
Objetivo de hibridoma
Tecnología que produce un anticuerpo en grandes cantidades (monoclonales)
Hibridoma
Cél plasmática B + célula tumoral (mieloma múltiple)
Procedimiento hibridoma
- Ratón se inmuniza con Ag durante semanas
- Proliferan células B y forman anticuerpos
- Se obtienen las células B del bazo de los ratones
- Se fusiona célula B con célula de mieloma múltiple (inmortales) . por electrofusión o polietinilglicol
- Células fusionadas se cultvian en HAT en pcillos y se analizan
- Las células híbridas que contienen el Ac apropiado se clonan in vivo o in vitro
Visualización de Fagos
Mediante DNA recombinante se pone gen en el génoma de un fago M13. Así, este expresa una proteína que genera anticuerpos contra bacterias.
Visualización Fagos
Una secuencia de genes que codifica un anticuerpo en particular se integra en la secuencia de ADN de un bacteriófago filamentoso, lo que permite su expresión en la superficie de la cápside del bacteriófago.
Función de visualización con fagos
Permite ver la afinidad de un anticuerpo por un antígeno, es decir, inmunoterapia
Tecnología del Ribosoma display
Sintetiza anticuerpos monoclonales in vitro . Aisla el gen de los anticuerpos de células humanos mediante PCR.
Transcrito in vivo
Humanización
Regiones hipervaraible de Ac son murinas
