DNA recombinante

Question 1

Formas de reproducción parasexual en bacterias

Answer 1

Transformacion
Conjugación
Transducción

Question 2

Reproducción por transformación

Answer 2

Bacteria capta del medio ADN libre que procede de otra bacteria o célula.

Question 3

Reproducción por conjugación

Answer 3

Bacteria hace contacto físico con otra bacteria con sus pilis, por donde pasan plasmido replicado.

Question 4

Transducción

Answer 4

Bacteriófago deposita su DNA en el DNA cromosómico de la bacteria.

La bacteria al replicarse copiará su ADN con parte del ADN del virus

Question 5

Dos vías de trasducción bacteriana

Answer 5

1. Muerte: Se introduce DNA de virus a membrana bacteriana. DNA bacteriano tiene DNA bacteriano y al replicar hace más virus. Al final se rompe membrana de bacteria y libera virus
2. Acoplar virus al sistemaDNA se agrega a DNA de bacteria. Aunque tiene info de virus, esta sana y no lo replica.

Question 6

Dos componentes que forman el DNA genómico de una bacteria

Answer 6

DNA cromosómico y plásmidos

Question 7

La bacteria puede vivir sin DNA cromosómico

Answer 7

Falso

Question 8

Plásmidos

Answer 8

Fragmento de DNA bacteriano, que pasa info de bacteria a bacteria como resistencia a antibióticos.

Question 9

dsDNA

Answer 9

DNA de dos cadenas

Question 10

Enzimas de restricción

Answer 10

Endonucleasas que cortan gen que se busca.

Question 11

¿Cómo formar DNA recombinante?

Answer 11

1. Se corta el gen deseado con enzima de restricción y se aisla. Al igual que el plásmido se corta en el sitio. Se unen y forman DNA recombinante.
2. Se pasa plasmido con gen a la bacteria.
3. La bacteria genera copias del plásmido, por ejemplo generar mucha insulina

Question 12

¿Por qué se utiliza una bacteria en el DNA recombinante?

Answer 12

Tiene mayor capacidad proliferativa. Te puede producir mucha insulina

Question 13

Bacteria principal para el DNA recombinante

Answer 13

E. colli, ya se conoce su ADN

Question 14

Bacteriofago funcionamiento
Latente

Answer 14

1. Virus inserta DNA
2. Bacteria lo reconoce y lo corta
3. Lo agrega al DNA cromosómico. Metila esa parte para que nose exprese (se dice que está latente)

Question 15

Las enzimas de restricción son _______________________ para cada bacteria

Answer 15

Únicas

Question 16

¿De dónde provienen las enzimas de restricción?

Answer 16

De bacterias que tiene capacidad de romper ADN que no es de bacteria (defensa en condiciones normales)

Question 17

Enzimas de restricción

Answer 17

Son endonucleasas, que actua como defensa de bacterias cuando entra ADN foráneo (CAR-E)

Degradan AND extraño, no el propio

Question 18

Pasos

Nomenclatura enzimas de restricción

Answer 18

1° - primera letra de género de bacteria E
2 y 3° - nombre de la especie co
4° Agrega letra o núm de acuerdo a cepa o serotipo R
5° Número romano de acuerdo a cronología en que se aislo V

EcoRV

Question 19

Enzimas del sistema de modificación

Answer 19

Metilasas: modifica ADN propio para que no se degrade. Se metila en residuos de citocina o adenina. ADN metilado inmune

Protege de bacteriofagos

Question 20

Enzimas de restricción I

Answer 20

• Corte asimétrico
• Corte lejos del sitio de reconocimiento (1000pb)
• Corte aleatorio, rio abajo o arriba

Question 21

Enzimas de restricción II

Answer 21

• Secuencia palindrómicas
• sitio de reconocimiento = a sitio de corte

Question 22

Enzimas de restricción III

Answer 22

• Asimétrico
• Corte lejos de sitio de reconocimiento (20 a 30 kb)

Question 23

Secuencia Palindrómica

Answer 23

Arriba derecha izquierda= abajo izquierda derecha

Question 24

Enzimas de restricción IV

Answer 24

Reconoce ADN metilado

Question 25

¿Qué tipo de enzima de restricción es usada?

Answer 25

II, es específica

Question 26

Diferencia entre corte cohesivo y romo

Answer 26

Cohesivo- asimétrico, en diferente posición (3 a 5 NT) Romo - parejo, simetrico en mabas cadenas

Question 27

¿Qué tipo de corte utiliza el DNA recombinante?

Answer 27

Cohesivo

Question 28

¿Los fragmentos en el DNA se cortan con misma enzima de restricción?

Answer 28

Sí, deben ser complementarios | Like rompecabezas

Question 29

¿Quien une finalmente el DNA recombinado?

Answer 29

La DNA ligasa genera enlaces fosfodiéster

Question 30

# DNA recombinante Vectores

Answer 30

Molécula dsDNA que tiene capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

Question 31

Vector de clonación ejemplos

Answer 31

Plásmidos, bacteriófagos, fagémidos, cósmidos

Question 32

Función y beneficio de vector de clonación

Answer 32

Almacena secuencias Obtiene gran cantidad de DNA

Question 33

Vector de clonación partes

Answer 33

1. Origen de replicación 2. Sitio múltiple de clonación (parte donde ira DNA complementario) 3. Marcador de selección

Question 34

# Vector de clonación Marcadores de selección

Answer 34

* Resistencia antibióticos * Prote verde fluorescente

Question 35

# Vector de clonación Función de marcador de selección

Answer 35

Ver que bacteria agarro el plásmido o DNA recombinante

Question 36

Vector de expresión función/ ejemplo

Answer 36

Producir transcrito o proteínas | Plásmido o bacteriófago

Question 37

Vector de expresión Partes

Answer 37

1. Ori de replicación 2. Promotor 3. IRES sitio de entrada a ribosoma 4. Sitio múltiple de clonación (donde se hace corte cohesivo) 5. Secuencia Poli A

Question 38

# Vectores Plásmidos

Answer 38

* dsDNA, circular * En bacterias y levaduras * Tamaño de gen a inserta: 20 kB | or, gen de resistencia antibiotica

Question 39

# Vector Bacteriófago

Answer 39

Virus que infecta bacterias * Se modifica genéticamente, elimina genes que no se requieren para replicación * Tamaño gen a inserta: 25 kb

Question 40

# Vector Cósmido

Answer 40

Se combina DNA de bacteriófago y un plásmido * Plásmido: gen resistencia a los antibióticos, sitio Ori. Lo hace circular * Bacteriofago: cos para empaquetar * Tamaño gen a inserta: 50 KB

Question 41

# Bacteriófago Ciclo lítico vs lisogénico

Answer 41

El ciclo lítico conduce a la muerte del huésped, mientras que el ciclo lisogénico conduce a la integración del fago en el genoma del huésped.

Question 42

# Vector Fagémidos

Answer 42

Plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fagos | Sin sitios cos, lo hace lineal

Question 43

# Vector Cromosomas artificiales

Answer 43

BAC (bacterias) YAC (levaduras | Muy grande

Question 44

Vectores con el tamaño del gen a insertar | Menor a mayor

Answer 44

1. Plásmido (20kb) 2. Bacteriófago (25kb) 3. Cósmido (50kb) 4. Fagémido (100kb) 5. BAC /YAC (>1000kb) cromosomas

Question 45

# Clonación molecular Fin de DNA recombinante en cuanto a la transformación celular

Answer 45

Material gneético se incorpora extracromósomicamente, se replica, transcribe y traduce

Question 46

Clonación

Answer 46

1. Fragmento DNA introducido en plásmido 2. Transformación de e. coli (bacteria) 3. Células hijas tienen plásmido recombinante (vienen de clona)

Question 47

Pasos de clonación molecular

Answer 47

1. Se prepara inserto que se va a clonar (enzimas restricción) 2. Preparar vector: cortar con ezima, desfosforilar vector, purifir plásmido 3. Ligación del inserto (gen) y vector con ligasa 4. Preparar células competentes (permeabilidad de membrana a aceptar vector con glicerol 10% o CaCl2) 5. Transformación celular: adquiere gen exógeno, nuevo fenotipo de célula 6. Identificar colonias celulares con vector recombinantes