Kryostatsnittning Flashcards
Vad händer med vävnaden efter man tagit de från provet från människan?
> > Inre och yttre faktorer påverkar vävnaderna genast efter det att de har avlägsnats ur kroppen vid individens död. Postmortala förändringar förorsakas framförallt genom;
- Autolys dvs enzymernas vävnadsupplösning
- Därefter tränger bakterier in i preparatet och förstör – vävnaden ruttnar.
- Om preparaten ligger i rumstemp, så torkar de och ändrar färg och form.
Vad gör prepareringen ?
> > Omedelbara åtgärder som stoppar dessa förstörelseprocesser och bevara-fixerar- – preparatets naturliga utseende i den mån det är möjligt, är således nödvändigt.
Fixering är avstannande av livsprocessen med minsta möjliga förändring av cellerna.
Vävnad för nedfrysning ska fixeras eller fryses ned så fort som möjligt efter utskärning av vävnaden från kroppens blodförsörjning, för att undvika morfologiska förändringar och nedbrytningar.
Vad finns det för köldblandningar?
- koksalt & is = -21 grader
- calciumklorid & is = -40 grader
- torris (fast CO2) & isopentan= -78 grader ger normal morfologi
Hur bildas vattenkristaller i preparatet?
Mycket snabb nedfrysning av materialet, gör att små iskristaller bildas av vattnet som finns i vävnaden, Och därmed bildas mindre eller inga artefakter alls och ingen skada sker på vävnaden.
–> däremot vid långsam nedfrysning kan orsaka en vävnads förändring pga iskristall bildning Detta kan ersätta den riktiga vävnads-arkitekturen med en s.k. ”schweizerost” effekt, dvs det bildas ”hål” i vävnaden.
Hur nedfrysnings metoden till?
Nedfrysning av färsk vävnad som innehåller enzymer används ofta för färsk muskelvävnad. Muskelvävnaden stöds och skyddas med targacant. som är ett inert stödmedium, och snabb fryses med flytande kväve eller flytande kväve/gasol.
» Nedfrysning av färsk vävnad– Vävnaden bäddas in i OCT och snabb fryses med flytande kväve eller med torris&isopentan.
Vad är Frysklister OCT Cryomount?
Användningsområde: Inbäddningsmedium för fryssnittning vid temperaturer från -q0 grader och lägre.
Fördelar: Lättlösligt i vatten och försvinner helt under efterbehandling och efterföljande färgning, vilket eliminerar oönskad bakgrundsfärgning.
Hur fungerar flytande kväve?
Flytande kväve är en färglös, luktlös och smaklös vätska.
Gasen är inte giftig och brinner inte.
Kokpunkten är -196 grader
Vad kan bli farligt med flytande kväve?
> > Vid förångning av flytande kväve finns risk för undanträngning av luftens syre, Vilket kan medföra att syrebrist uppstår.
Vid hantering av flytande kväve innebär den låga temperaturen risk för köldskador. Undvik stänk.
Hur ska man hantera flytande kväve ?
- Vid små spill skall man lämna lokalen och bedöma om ytterligare åtgärder behöver vidtas.
- Vid stora utsläpp skall området stängas av. Sanering sker genom att ventilera.
- Undvik att åka hiss med behållare med flytande kväve.
- Flytande kväve får ej hällas i vask.
Hur går själva kryostatsnittningen till?
Avlägsna det frusna blocket från -80 grader frys och låt det temperatur utjämnas i kryostat kammaren vid ung.
• Den optimala temperaturen för kryostat snittning beror på vilken typ av vävnad det är och om vävnaden nyligen frysts ner färsk eller varit pre-fixerad, med efterföljande kryoskydd av OCT eller tragakant.
Hur gör man efter preparatet snittats?
Kryostat snitten fångas upp på rumstempererade objektsglas.
- Låt snitten luftfixeras–>lufttorka
- Färga snitten, montera
- Eller post- -fixera i etanol/metanol eller aceton, vilket är en rutinmetod immunhistokemisk analys mha antikroppar.
