Cellodling

Question 1

Vad har man för användning av cellodling ?

Answer 1

• Forskning
• diagnostik
• behandling
• in vitro fertilisering
• läkemedelsindustri
• tillverkning av av monoklonala antikroppar

Question 2

Vad är viktigt att veta om riskbedömning+ riskfaktorer?

Answer 2

Arbets givare måste berätta om svensk lagstifning

Question 3

Vad ska man tänka på vid smittorisken inom cellodling ?

Answer 3

• Humanodlade celler:
• VIRUS: hepatit B, HIV, Vectorer(är cirkulera DNA små finns bakterier innehåller DNA som gör att bakterier bli resistenta)
• tumör celler
• cellgifter
• tillväxtfaktorer
• tryptanblått
• Isotoper

Question 4

Hur ska arbetet utföras säkrast ?

Answer 4

• Anvädning av skyddskläder, rena skor och handskar.
• Arbete med celler, homogenisering, spädning och tömning av rör ska utföras i LAF-bänk.
• LAF-bänk ska hållas ordentligt ren under alla tillfällen
• Använd alltid engångs bruka pipettspetsar
• Får absolut inte äta eller dricka

Question 5

Hur ska man hantera avfallshantering ?

Answer 5

Samlas alltid upp i en speciell tät behållare, autoklaveras och transporteras för destruktion.
Skärande och stickande avfall ska samlas i speciella gula behållare för autoklavering och desinfektion innan bortskaffande /återvinning

Question 6

Viktigt maskiner/instrument som ska finnas i ett cellodlingslabb?

Answer 6

• LAF-bänk (Laminar Air Flow)
• Inkubator: CO2, temperatur och luftfuktighet
• Centrifugering och pipettering
• invertmikroskopering

Question 7

Vad ska inkubatorns värden stå på?

Answer 7

Hjärtat av cellodlingen!
Temperatur = 37 grader
Luftfuktighet= 95-98%
CO2= 5% pH= 7.2 -7.5

Question 8

Hur ska man förvara cellerna ?

Answer 8

• Kort förvaring: -80 till -130 grader (ca- 3 månader)
• Lång förvaring flytande kväve: -196 grader (ca flera år)
• Frystorkat tillstånd

Question 9

Vilka organismer är mest förekommande so riskfaktorer?

Answer 9

• framförallt olika virus vid human cellodling
• Bakterier: användning av antibiotika
• Mykoplasma: motstånds kraftiga mot antibiotika
• svamp: mögelsvamp eller jästsvamp
• Prioner

Question 10

Vad är symptomen vid kontamination ?

Answer 10

• Färgomslag
• Tillväxthastighet: Växer mkt långsam
• Morfologi: utdragna, klumpiga
• Cellproduktion: minskning av dem
• Celldöd: Ofta ser man detta

Question 11

Vad finns det för medier?

Answer 11

Basala odlingsmedier:

• aminosyror
• vitamin
• glukos
• salter
• pH 7.2-7.5 + pH indikator

Question 12

vad innehåller komplettmedium ?

Answer 12

Extra ingridienser

• Basal medium
• Antibiotika (pest)
• Fetal kalv serum (FCS)
• Tillväxtfaktorer
• Insulin

Question 13

Vad är adherenta celler?

Answer 13

Epitel celler binväv celler, muskel celler, fibroblaster.

- Behöver en yta att få stå vid.

Question 14

Vad är suspensionskulturer?

Answer 14

Vävnadsvätska

- Kan bara flytta runt

Question 15

Vad är odlingbehållare ?

Answer 15

Där man odlar ut cellerna. Finns olika former och storlekar

Question 16

Hur fungerar odling av adherenta celler?

Answer 16

• Primär kultur (passage 1): vävnadsodling, hud, muskel, nervvävnad
• cellinje: celler från primär kultur (passage 2) har överförts till ny odlings behållare
• Etablerad cellinje: kan genomgå oändliga passager (immortaliserad)–> transformerar celler till cancer celler-växer och dör inte

Question 17

Vad är bra/dåligt med passiv /aktiv adhesion?

Answer 17

man vill undvika passiv (sekunder)då man vill ha levande.

Aktiv är levande tar minuter till timmar

Question 18

Aktiv adhesion vad innebär det?

Answer 18

Gör att cellerna kan binda till varandra och känna av sin omgivning.

Question 19

När vet man om det är dags att skörda?

Answer 19

konfluensen man brukar avgöra denna via %.

Question 20

Hur fungerar lösgöring av celler?

Answer 20

• Mekaniskt: skaka och skrapa

- Enzymatiskt: trypsin (trypsinet äter upp dess receptorer mm. Bara 10-30 min inte längre helst

Question 21

Hur fungerar nedfrysning av celler?

Answer 21

• Ska ske efter få passager från primär kulturen eller celllinjen
• Cellerna ska ha bra tillväxt och fri från infektioner
• Rätt koncentrationer av kryoskyddande ämnen.
• Nedfrysning ska ske relativt långsamt (gör att vätskan är den som först kommer frysa vi vill få bort vätskan från cellen)
• rätt förvaringstemperatur

Question 22

Vad är viktigt att tänka på vid upptining av cellerna ?

Answer 22

• En snabb upptining = 1 min i vattenbad
• skölj kryorören med 70% alkohol
• För över cellsuspensionen till centrifug rör innehållande 10 ml komplettmedium
• centrifugera
• Häll av supernatanten
• Resuspendera pelleten med 5 ml komplettmedium
• för över cellsuspension till odlingbehållare och tillsätt ytterligare odlingsmedium
• Efter kontroll med invertmikroskop flytta odlingsbehållaren till CO2 inkubatorn

Question 23

Hur fungerar tillväxthastigheten?

Answer 23

• Effekten av lkm
• Effekten av cell transfektion, tillväxtfaktorer och hormoner
• Test och jämförelser av olika odlingsmedier
• bestämning av tillåtna antal passager på en viss celltyp

Question 24

Vad gör en totipotent stamcell?

Answer 24

Kan ge upphov till all celler i ett embryo och placenta.
En cell som kan ge upphov till en ny individ
- ex. det fertiliserade ägget och upp till 8 cells stadiet

Question 25

Vad gör en pluripotent stamcell?

Answer 25

Kan ge upphov till all celler i en individ.

• Kan ge upphov till endoderm, mesoderm, ectoderm och könsceller.
• Ex. morulaceller och inre cellsmassceller från blastula

Question 26

Vad gör multipotent stamcell?

Answer 26

Kan ge upphov till en eller flera celler i en vävnad/organ

- EX. ectodermceller,

Question 27

Vad gör unipotent stamcell?

Answer 27

Kan endast ge upphov till en celltyp

Question 28

Vad bildar ektodermet?

Answer 28

• Hud
• Nervsystemet
• Sensoriskt epitel i öga, öra och näsa

Question 29

Vad bildar mesodermet ?

Answer 29

• Muskler
• Ben
• bindväv
• blodkärl
• hjärta

Question 30

Vad bildar endodermet ?

Answer 30

• magtarmkanal
• luftvägar
• lungor
• tyroidea

Question 31

Vad är morfogenes?

Answer 31

• Formbildning, uppkomsten av kroppens och organens former under individens utveckling
• Morfogenesen startar genom gastrulering
• Gastrulering är en vävnadsvandring som medför att mage tarm kanalen skapas ( i människor börjar de i vecka 3)

Question 32

Vad innebär Differentiering ?

Answer 32

Det är en process som gör att cellerna blir olika trots att de har samma genetiska utgångsmaterial och tillhör samma organism.
När äggcellen befruktas sker första celldelning och därefter celldifferntiering som leder till olika celltyper. I många flercelliga organismer finns det olika sorters celler, som kan skilja sig väldigt mycket i utseende och funktion.
(vilka gener som uttrycks i en cell bestäms av epigenetiska mekanismer)

Question 33

Hur påverkar morfogener differentieringen ?

Answer 33

• En morfogen påverkar en cells differentiering beroende på morfogenens koncentration. Morfogenen sprids från en källa och bildar en koncentrationsgradient.
• En morfogen är en signalmolekyl som verkar direkt på cellen.
• Exempel på morfogener är tillväxtfaktorer, typ fibroblast growth factor

Question 34

Vad kan dem somatiska cellerna göra?

Answer 34

Kan bli reprogrammerade (omprogrammerade) och bidra till det genetiska materialet för att generera

1. en ny individ genom somatic cell nuclear transfer.
2. Embryonal-stamceller genom SCNTeller ESC-liknande celler genom IPS.

Question 35

Vad menas med regenerativ medicinomprogrammering av celler?

Answer 35

• Celler med samma genotyp som patienten (ingen organstötning)
• Tidiga gener slåss på och somatiska cellspecifika gener stängs av.