Cellodling Flashcards
Vad har man för användning av cellodling ?
- Forskning
- diagnostik
- behandling
- in vitro fertilisering
- läkemedelsindustri
- tillverkning av av monoklonala antikroppar
Vad är viktigt att veta om riskbedömning+ riskfaktorer?
Arbets givare måste berätta om svensk lagstifning
Vad ska man tänka på vid smittorisken inom cellodling ?
- Humanodlade celler:
- VIRUS: hepatit B, HIV, Vectorer(är cirkulera DNA små finns bakterier innehåller DNA som gör att bakterier bli resistenta)
- tumör celler
- cellgifter
- tillväxtfaktorer
- tryptanblått
- Isotoper
Hur ska arbetet utföras säkrast ?
- Anvädning av skyddskläder, rena skor och handskar.
- Arbete med celler, homogenisering, spädning och tömning av rör ska utföras i LAF-bänk.
- LAF-bänk ska hållas ordentligt ren under alla tillfällen
- Använd alltid engångs bruka pipettspetsar
- Får absolut inte äta eller dricka
Hur ska man hantera avfallshantering ?
Samlas alltid upp i en speciell tät behållare, autoklaveras och transporteras för destruktion.
Skärande och stickande avfall ska samlas i speciella gula behållare för autoklavering och desinfektion innan bortskaffande /återvinning
Viktigt maskiner/instrument som ska finnas i ett cellodlingslabb?
- LAF-bänk (Laminar Air Flow)
- Inkubator: CO2, temperatur och luftfuktighet
- Centrifugering och pipettering
- invertmikroskopering
Vad ska inkubatorns värden stå på?
Hjärtat av cellodlingen!
Temperatur = 37 grader
Luftfuktighet= 95-98%
CO2= 5% pH= 7.2 -7.5
Hur ska man förvara cellerna ?
- Kort förvaring: -80 till -130 grader (ca- 3 månader)
- Lång förvaring flytande kväve: -196 grader (ca flera år)
- Frystorkat tillstånd
Vilka organismer är mest förekommande so riskfaktorer?
- framförallt olika virus vid human cellodling
- Bakterier: användning av antibiotika
- Mykoplasma: motstånds kraftiga mot antibiotika
- svamp: mögelsvamp eller jästsvamp
- Prioner
Vad är symptomen vid kontamination ?
- Färgomslag
- Tillväxthastighet: Växer mkt långsam
- Morfologi: utdragna, klumpiga
- Cellproduktion: minskning av dem
- Celldöd: Ofta ser man detta
Vad finns det för medier?
Basala odlingsmedier:
- aminosyror
- vitamin
- glukos
- salter
- pH 7.2-7.5 + pH indikator
vad innehåller komplettmedium ?
Extra ingridienser
- Basal medium
- Antibiotika (pest)
- Fetal kalv serum (FCS)
- Tillväxtfaktorer
- Insulin
Vad är adherenta celler?
Epitel celler binväv celler, muskel celler, fibroblaster.
- Behöver en yta att få stå vid.
Vad är suspensionskulturer?
Vävnadsvätska
- Kan bara flytta runt
Vad är odlingbehållare ?
Där man odlar ut cellerna. Finns olika former och storlekar
Hur fungerar odling av adherenta celler?
- Primär kultur (passage 1): vävnadsodling, hud, muskel, nervvävnad
- cellinje: celler från primär kultur (passage 2) har överförts till ny odlings behållare
- Etablerad cellinje: kan genomgå oändliga passager (immortaliserad)–> transformerar celler till cancer celler-växer och dör inte
Vad är bra/dåligt med passiv /aktiv adhesion?
man vill undvika passiv (sekunder)då man vill ha levande.
Aktiv är levande tar minuter till timmar
Aktiv adhesion vad innebär det?
Gör att cellerna kan binda till varandra och känna av sin omgivning.
När vet man om det är dags att skörda?
konfluensen man brukar avgöra denna via %.
Hur fungerar lösgöring av celler?
- Mekaniskt: skaka och skrapa
- Enzymatiskt: trypsin (trypsinet äter upp dess receptorer mm. Bara 10-30 min inte längre helst
Hur fungerar nedfrysning av celler?
- Ska ske efter få passager från primär kulturen eller celllinjen
- Cellerna ska ha bra tillväxt och fri från infektioner
- Rätt koncentrationer av kryoskyddande ämnen.
- Nedfrysning ska ske relativt långsamt (gör att vätskan är den som först kommer frysa vi vill få bort vätskan från cellen)
- rätt förvaringstemperatur
Vad är viktigt att tänka på vid upptining av cellerna ?
- En snabb upptining = 1 min i vattenbad
- skölj kryorören med 70% alkohol
- För över cellsuspensionen till centrifug rör innehållande 10 ml komplettmedium
- centrifugera
- Häll av supernatanten
- Resuspendera pelleten med 5 ml komplettmedium
- för över cellsuspension till odlingbehållare och tillsätt ytterligare odlingsmedium
- Efter kontroll med invertmikroskop flytta odlingsbehållaren till CO2 inkubatorn
Hur fungerar tillväxthastigheten?
- Effekten av lkm
- Effekten av cell transfektion, tillväxtfaktorer och hormoner
- Test och jämförelser av olika odlingsmedier
- bestämning av tillåtna antal passager på en viss celltyp
Vad gör en totipotent stamcell?
Kan ge upphov till all celler i ett embryo och placenta.
En cell som kan ge upphov till en ny individ
- ex. det fertiliserade ägget och upp till 8 cells stadiet
