Immunologisk metodik Flashcards
Vad är användnigns områden inom immunohistokemi (IHC)?
- Diagnos av immunologiska sjukdomar
- Diagnos-klassificera tumörer
- Påvisa mikroorganismer
Hur färgas cellkärnor och cytoplasma inom immunohistokemi?
Blått= cellkärnor grön= Cytoplasmatiska
Hur fungerar antikropparna inom detta ämne?
Fungerar som analytiska “verktyg”
Vad är antigen för något ?
Ett främmande ämne.
Vid ett antigen kan de fastna som Y liknande molekyler vilka är dessa?
Antikroppar = Y
Varför är antikroppar bra vid analys?
Olika analysmetoder kan utnyttja olika antikroppars specifika förmåga att fästa till olika epitoper (antigena determinanter) på ett antigen. Samma cell kan märkas in med olika anitkroppar.
Vad finns det för olika metoder ?
- Immunhistokemi= vävnad
- Immunocytokemi= celler
- Immunoprecipitation = lösa celler
- Dot blot, Slot blot= RNA/DNA seperation
Vad är ett antigen mer specifikt? Ge exempel på antigen:
En för organismen främmande molekyl som framkallar en reaktion hos immunförsvaret. Denna reaktion leder till nybildning av antikroppar.
- Protein -proteinföreningar
- (Lipider)
- (Kolhydrater)
- Haptener, ex metall+protein
Vad är en epitop ( antigen determinat)
Den del av ett antigen dit en specifik antikropp binder med en kort aminosyrasekvens.
Vad består en antikropp utav?
Ett glykoprotein (makromolekyl bestående av protein och kolhydrater) som produceras i en organism vid antigenstimulering.
Har stort specificitet till det stimulerande antigenet! Mycket specifikt.
Vilka klasser består en antikropp av?
Fem olika klasser: IgA, IgD, IgE,IgG och IgM
Förklara hur antikropps kedjor och ”Fab” innebär ?
Kedjorna är sammanlänkade med disulfidbindningar.
Den yttre delen på båda kedjorna (Fab-domänen) är hypervariabla och bildar tillsammans ”antigen-bindning site”
Ex: IgG består av 4 kedjor, 2 tunga (blå) och 2 lätta (röda)
Vad är den viktiga skillnaden mellan polyklonala och Monkklonala antikroppar?
PK= heterogen samling (flera olika antikroppar) riktade mot flera olika epitoper.
Kan affinitetsrenas.
- dessa märker in till flera olika epitoper.
MK= identiska antikroppar riktade mot en epitop.
”Mest önskvärt”- vid biokemisk tekniker
- binder till endast en epitop
Varifrån kommer antikropparna ?
Dem köps in. Viktigt att kunna vilken man ska ha till vad osv.
Vart bildas antikroppar ?
Dem bildas i B-lymfocyter (vita blodkroppar)
Hur går det till när B-celler bildar antikroppar ?
- B-celler har membranbundna antikroppar bundna till sin yta.
- Främmande antigen träffar antikropp på B-cell.
- B-cellen stimuleras till delning ( genom utmognad till plasmacell) till samt tillverkning och utsöndring av flera antikroppar
Varför är det svårare av produktion av monoklonala antikroppar?
Svårare för att man får tillsätta en sorts cancercell–> Antikropparna selektiviteras ut får då antikroppar. (?)
Vart härstammar polyklonala antikroppar från?
Härstammar från flera olika cell-linjer och kan därmed binda till flera olika epitoper
Vart härstammar monoklonala antikroppar från?
Från en enda cell-linje (klon) kan binda till endast en typ av epitop
Vad innebär antigen-antikroppsreaktion?
Antikroppens “bindning site” känner igen en epitop på antigenet och binder sig dit med hjälp av:
- van der Waals krafter
- vätebindningar
- elektrostatiska interaktioner
- hydrofobiska krafter
Vad innebär affinitet-aviditet?
Affinitet= styrkan i reaktionen mellan en antigen epitop och en anitkropp eller hur väl antigenets epitoper passar in i antikropppen
Aviditet= Sammanlagda styrkan mellan en antikropps bindningsställen och ett antigen
(“LOW”- epitopen ser annorlunda ut. Styrkan beror hur väl den passar in.)
Vad är det vi vill ha vid färgning av antikroppar (affinitet)?
Vi vill vid färgning av antikroppar få “HÖG” affinitet.
Vad innebär en korsreaktion?
Antikroppar binder till epitoper, som ej passar perfekt.
Vad är aviditeten beroende utav?
Aviditeten är beroende av den sammanlagda affiniteten mellan ak “bindning site” och epitop.