Immunfenotyping Flashcards
Hvordan benyttes flowcytometri i diagnostikk av blodsykdommer? Hva er fordelen? Hva måles?
Rask metode som kan telle og karakterisere et stort antall celler i en løsning. Kan karakterisere basert på størrelse, granularitet (kompleksitet), DNA-innhold (vha DNA-merking), spesifikke markører (uttrykk av proteiner på overflaten eller intracellulært (må lysere)).
Kan benyttes på blod, spinalvæske, beinmarg, bronkialskyllevæske, biopsier fra tumor eller lymfeknuter, urin.
Spredning av lysstråler målt framover: avspeiler størrelse
Spredning av lysstråler målt i 90 grader: avspeiler kompleksitet
Hvordan benyttes fluorescens i diagnostikk av blodsykdommer? Hva kan være en utfordring ved bruk av flere fluorokroumer i samme måling, og hvordan løses dette?
Merker målprotein med fluorokrom. Måler ofte flere fluorokromer samtidig, og da er det viktig å unngå overlapping av disse da det vil gi falsk positiv. Løses ved å velge fluorokromer som emitterer lys i bølgelengder som ikke overlapper, eller ved å bruke filtre som kompenserer for overlappet.
Hvordan benyttes immunfenotyping i diagnostikk av blodsykdommer?
Benytter monoklonale antistoffer merket med fluorokrom. Panelet med Ab bør kunne skille normale og patologiske celler.
Hva er CD-markører? Hvordan kan de si noe om i hvilket stadie i celleutvikllingen kreftcellene er utviklet?
CD-markører er monoklonale Ab laget i laboratorier mot epitoper på overflatemolekyler på leukocytter. Disse har en internasjonal nomenklatur, med CD og et tall bak. Det finnes CD1-CD371.
CD-markører i B-cellelinjen kan si noe om fra hvilket stadie i B-celleutviklingen kreftcellene er utviklet. Dette fordi det i tillegg til markører som omfatter hele linjer, er markører tidlig i linjen, sent i linjen og på ulike steder midt i linjen. Samme gjelder for CD-markører i T-cellelinjen.
Hva er bra med CD45?
kan skille mellom kjerneholdige celler og eks RBC som ikke er blitt lyserte, da den kun uttrykkes på kjerneholdige celler.
Hva er gating?
«avgrensning», analysering av flowcytometridata.
Enkelt forklart vil man ved gating velge et område på et scatter eller histogram, som bestemmer hvilke celler man ønsker å analysere videre. En «gate» er en grense som benyttes i definering av en partikkels karakteristikk for bruk i videre analyse. Bruker et panel med markørmolekyler som visualiseres ved fluorescens.
