Hybridisierung

Question 1

Wie kann man nachweisen, dass dsRNA Moleküle zu RNA Interferenz führen?

Answer 1

RNA Interferenz wird einmal mit einzelsträngiger RNA und einmal mit doppelsträngiger RNA durchgeführt

Question 2

Wie wird RNAi in C. elegans oder Arabidopsis verstärkt?

Answer 2

Beide besitzen RNA abhängige RNA-Polymerasen. Durch diese wird die siRNA amplifiziert.

Question 3

Welches dieser Enzyme spielt keine essentielle Rolle bei der RNA Interferenz?
Endonuklease
Dicer
AGO
Topoisomerase
RNA abhängige RNA-Polymerase
RNA Polymerase II

Answer 3

Topoisomerase

Question 4

In einer Northern-Hybridisierung mit einer Ribosonde erhalten sie zu viele unspezifische Banden - Kreuzhybridisierung. Wie können sie diese vermeiden.

Answer 4

Kreuzhybridisierungen können durch erhöhen der Stringenz verbessert werden.
>hohe Temperatur
>niedriger Salzgehalt
>hohe konz. denaturierender Agentien

Question 5

RNAi kann für funktionelle Genomik genutzt werden. Dies wurde besonders erfolgreich für C.elegans eingesetzt. Warum?

Answer 5

• RNA abhängige RNA-Polymerase

- C. elegans nimmt dsRNA durch E. coli auf

Question 6

Vorteile von RNAi gegenüber reverser Genetik

Answer 6

• spezifischer
• durch knockdown wird Gen nicht zerstört, bei k.o. gibt es keine Mutanten von essentiellen Genen von hypomorphen Mutanten
• Einfach zu designen

Question 7

Homozygote Mausmutanten von Dicer sterben bereits als Embryo, obwohl kein Virenbefall und damit auch keine siRNA-Abwehr nötig ist. Warum?

Answer 7

Dicer produziert microRNAs, die essentiell sind > Mausmutanten sterben