DNA-Klonierung

Question 1

Warum spielen Mitochondrien eine Rolle für dem Erfolg des Klonierens beim Kerntransfer, aber nicht beim Embryo Splitting?

Answer 1

Beim Embryo Splitting Enthalten beide Zellen bereits kompartible Mitochondrien und Kerne. Beim Kerntransfer muss darauf geachtet werden, dass der Kern der integriert wird mit den Mitochondrien der Eizelle kompatibel ist, da diese ein eigenes Genom besitzen.

Question 2

Wie kann man ausschließen, dass Dolly bei einer nicht erkannten Befruchtung entstanden ist?

Answer 2

An Dollys Phänotyp kann erkannt werden, dass die Klonierung funktioniert hat, da dieser unterschiedlich zu dem der Leihmutter ist. Außerdem könnte die DNA sequenziert werden und mit der der Mutter verglichen werden.

Question 3

Weiße Kolonien, aber kein längeres Insert nach Restriktionsverdau. Wiso?

Answer 3

Durch Einbau oder verlust einer einzigen Base wird der Leserahmen verschoben, wodurch die Kolonie weiß ist. Eine weiße Kolonie bedeutet nich direkt, dass die Integration eines Inserts funktioniert hat.

Question 4

Wie heißt das erste jemals geklonte größere Tier?

Answer 4

Dolly

Question 5

Zwei Plasmide werden fusioniert und können so nicht aus E. coli isoliert werden. Wiso?

Answer 5

Beide Plasmide besitzen jeweils ein OriR. Dadurch stoßen die Polymerasen gegeneinander, was tödlich für die Plasmide ist.

Question 6

Plasmide die multi-copy vorliegen nennt man..

Answer 6

..relaxierte Plasmide

Question 7

Welche Art Enzyme brauchen sie um mittels Gateway-Technologie zu klonieren?

Answer 7

Integrase, Excisionase, (Host integration Factor HIF)

Question 8

Funktionen der Vektorattribute erklären:
Restriktionsstelle
Replikationsursprung
Promotor
Antibiotikaresistenz

Answer 8

Restriktionsstelle: Erlaubt die Insertion von DNA in den Vektor
Replikationsursorung: Dublikation des Vektors
Promotor: Expression des Inserts
Antibiotikaresistenz: Selektion der Bakterien, die einen Vektor aufgenommen haben

Question 9

Welche enzymatischen Aktivitäten brauchen sie für Golden Gate Klonierung?

Answer 9

• Typ IIB Restriktionsenzyme (BsaI) > schneidert hinter Erkennungssequenz
• Ligase

Question 10

Wie können sie ohne Restriktionsenzyme klonieren?

Answer 10

Gibson Assambly:

5’-3’-Exonuklease + Plymerase +Ligase

Question 11

Nennen sie ein wichtiges Problem des Gibson-Clonings.

Answer 11

• Gen kann nicht ohne weiteres wieder entfernt werden

- Einzelstrang-DNA kann sich selbst falten (Loops) wodurch sie nicht mehr an DNA-Fragment binden