CRISPR/Cas9

Question 1

Was passiert in einer Zelle, nachdem Cas9 geschnitten hat, aber kein Template für homologe Rekombination mitgeliefert wurde?

Answer 1

Ohne Template für homologe Rekombination (homology directed repair HDR) wird die geschnittene Stelle zufällig durch den Reperaturmechanismus der Zelle repariert (non-homologous end joining NHEJ).

Question 2

Wie kann Cas9 in der Gentherapie eingesetzt werden, um Erbkrankheiten zu heilen?

Answer 2

Es kann das kaputte Gen schneiden und gesundes Gen durch Template homolog rekombinieren (HDR-Weg)

Question 3

Welche enzymatische Aktivität besitzt Cas9?

Answer 3

Doppelsträngige DNA-Endonuklease Aktivität

Question 4

CRISPR repeats finden sich in..

Answer 4

…bakterieller DNA

Question 5

Welches der folgenden Proteine wurde nicht für Genomedeting genutzt?
ZFN
TALENs
CRISPR/Cas9
MHC

Answer 5

MHC -ist für Immunantwort zuständig

Question 6

CRISPR Sequenzen im Zielgenom werden erkannt durch..

Answer 6

RNA

Question 7

Wofür steht die Abkürzun CRISPR

Answer 7

clustered regularly interspaced short palindromic repeats

Question 8

Wie wird die guide RNA für die Genomedetierung hergestellt und welche Rolle spielt sie für den Prozess.

Answer 8

Die guideRNA wird durch Verbindung der crRNA und tracrRNA hergestellt. Dadurch müssen die beiden Teile nicht mehr in der Zelle zusammengefügt werden. Konzentration der Komplexkomponenten ist wichtig für bildung des Komplexes.

Question 9

Wie unterscheidet sich CRISPR/Cas9 fundamental von anderen Genomedetingwerkzeugen?

Answer 9

Es enthält RNA und hat eine höhere Erfolgsrate. Synthetisierung der RNA ist leichter als die von ganzen Proteinen

Question 10

Welche vorteile haben Genomeedetingwerkzeuge gegenüber CRISPR/Cas9?

Answer 10

Andere GEW können gezielter schneiden, da Nuklease mit beliebig vielen Basen designed werden kann. Das führt zu weniger OFF-Targets. Außerdem ist keine PAM Sequenz nötig.

Question 11

Cas9 muss in seiner Sequenz verändert werden um eukaryotisches Genom zu edetieren. Inwiefern?

Answer 11

Es braucht ein Nuclear localization signal (NLS) um in den Kern zu gelangen. (KKKKRV)

Question 12

Wie können Phagen der CRISPR/Cas Abwehr ausweichen? Nenne 2 Möglichkeiten.

Answer 12

• Zufällige Mutation
• Mutation an Schnittstelle
• Anti-CRISPR (inhibitoren)
• INtegration in CRISPR/Cas Gen

Question 13

CRISPR/Cas loci sind auch in Phagen gefunden worden. Welchen Vorteil können Phagen davon haben?

Answer 13

Immunität gegen CRISPR > Vorteil bei Mehrfachinfizierung