Histotechnologie Flashcards
Quel est le seul temps qu’on a un STAT en histotechnologie ?
Quand on a une congelation, donc le patient est encore sur la table d’opération
Quels sont les choses qu’on examine dans un examen macroscopique d’un tissu ?
- Aspect
- Texture
- Couleur …
Quels sont les étapes de faire une lame à partir d’un tissu ?
- Fixation (très important ne peut pas refaire comme autre étape) *
- Déshydratation *
- éclaircissement *
- Imprégnation *
- Enrobage
- Coupe au microtome
- étalement et séchage
- Coloration
* Font partie de la circulation
A quel concentration d’alcool on devrait commencer la déshydratation avec un tissu de cerveau ou embryon ?
30 % et non 70% comme normalement
** RT ** Comment on fait pour verifier si on a vraiment toute enlevé l’eau des tissus ?
On met un peu de sulfate anhydre et si ca devient bleu il y a presence d’eau
Quels sont les buts de la fixation ?
- Elle prévient l’autolyse et l’activité bactérienne
- Elle conserve les elements extracellulaire
- Elle stabilise les proteins
- Elle resort les contrastes des différents elements cellulaire et rehausse les colorations
- Elle facilite la manipulation par durcir le tissu
Quels sont les 2 methods de fixation ?
Chimique et physique
Comment en met la pièce et le fixateur chimique ensemble ?
Il faut plonger la pièce dans le fixateur et TOUTE les surfaces doivent être en contact avec le fixateur.
Combien de fixateur en a besoin pour une pièce ?
Il faut qui soit 20 fois le volume de la pièce
Quels sont les 3 methods de fixation physique et expliquer chaque ?
- Congelation : C’est très rapide et ca évite la formation de cristaux. Exemple de l’azote liquid ou OCT
- Déshydratation: Exemple un frottis sanguin
- Chaleur: C’est la plus rapide, mais en perd beaucoup d’élément extracellulaire et les lipids. Elle n’est pas beaucoup utilise pour l’histo, mais plus pour micro (gram)
Quel est la meilleur facon de conserver les lipids ?
Avec la method de congelation
Disparition des proteins = ?
La désintegration de la cellule
Quel sont les classification des fixateurs ?
- Additif ou non additive
- Coagulant ou non coagulant
- Tolerant ou non tolerant
Quels sont les fixateurs additive ?
- Formaldéhyde
- Glutaraldéhyde
- Acide picrique
- Chlorure mercurique
- Trioxide de chrome
- Tétroxyde d’osmium
- Sulfate de zinc ou chlorure de zinc
Quels sont les fixateurs non additif ?
- Ethanol
- Methanol
- Acide acétique
- Acétone
Que font les fixateurs additive ou tissus ?
Il s’attache sur les proteins par une charge électrique
Que font les fixateur non additif ou tissus ?
Elle fait la molecule perd son lien avec l’eau et fait durcir le tissu.
Que fait un fixateur coagulant à la pièce ?
Elle le tourne dans une texture comme un réseau de fibre.
Que fait un fixateur non coagulant à la pièce ?
Elle le tourne comme un gel
Quels sont les fixateurs coagulants ?
- Alcool
- Sels de zinc
- Chlorure de mercurique
- Trioxide de chrome
- Acide picrique
Quels sont les fixateurs non coagulants ?
- Formaldéhyde
- Glutaraldéhyde
- Tétroxyde d’osmium
- Biochromate de potassium
- Acide acétique
Qu’est-ce qu’un fixateur tolerant fait à la pièce ?
Il peut être laisser longtemps sont cause trop de dommage, donc ne provoque pas de durcissement ou de rétrécissement
Qu’est-ce qu’un fixateur non tolerant fait à la pièce ?
Le tissu ne peut pas rester dans le fixateur longtemps, car il cause un durcissement excessif. Il faut le transferer dans 70% d’alcool
Quel est le but d’un fixateur secondaire ?
Il augmente l’affinité du tissu pour le colorant, donc du postmordancage qui est des elements qui ont une affinté pour le colorant
Quels sont les 8 facteurs qui influence la fixation ?
- Température
- Grosseur de la pièce
- Volume de fixateur
- Vitesse de penetration
- Temps
- Entrepossage du tissu
- pH
- Pression osmotique
Quel est la meilleur temperature pour la fixation et pourquoi une haute temperature n’est pas bonne ?
- La meilleur temperature est la temperature de la pièce.
- Des haute temperature ne sont pas bonne, car elle cause l’autolyse meme si la fixation se fait plus vite.
Quel est l’épaisseur maximum quand devrait couper de tissu ?
3 mm
La vitesse de penetration n’égale pas __________ ?
La vitesse de fixation
Nommer les fixateurs en ordre décroissant de leurs vitesse de penetration.
** La vitesse de fixation est dans l’ordre contraire, savoir les deux **
- Formaldéhyde
- Acide acétique
- Chlorure mercurique
- Alcool méthylique
- Alcool éthylique
- Tetroxide d’osmium
- Acide picrique
Dans quoi on peut entreposer les tissus ?
- Dans du formol tamponné
- Si immunohistochimie dans 70% d’alcool
Quel est le pH recommandé pour la fixation ?
- 6 à 8
- 7.2 à 7.4 pour une microscopie électronique
Que se passe t’il au tissue dans une solution hypertonique?
Elle cause la retraction du tissu
Que se passe t’il au tissue dans une solution hypotonique?
Elle cause le gonflement du tissu
Quel fixateur sont meilleur pour les acides nucléiques ?
Alcool-acétique et Carnoy
** Le formol ne fixe pas ADN/ARN
Les lipids sont fixer par plusieurs fixateur, mais ____ ?
Sont perdu dans les autres étapes
Quel fixateur nous permet de ne pas perde les lipides dans les autres étapes ?
Le tetroxide d’osmium et l’acide chromique
Quel fixateur fixe le mieux les polysacharride (glycogène) ?
Alcool et ensuite formol
Qu’est-ce que l’effet de fuite dans les polysaccharide ?
C’est un artefact ou des substances sort à l’extérieur de la cellule.
Les glycoproteins sont précipité par quoi ?
L’acool
Même si la formaldehyde est utilise comme routine elle ne donne pas _____ ?
Les meilleurs résultats
Quels sont les 4 groups de fixateurs ?
- Microanatomique : Fixateur de routine qui preserve les structure cellulaire.
- Cytologique : Elle preserve des elements intracellulaire, mais peut perde des elements microanatomique.
- Histochimique : Elle preserve les constituants chimiques (habituellement congelé)
- Microscopie électronique : Préserve l’ultrastructure
L’acide acétique glacial détruit quoi ?
Les mitochondries et l’appareil de Golgi
Vrai ou faux: Les fixateurs de base d’aldéhyde peuvent être utilise seul ?
Vrai
Comment que les fixateurs d’aldéhydes agissent ?
Ils forment des ponts entre les proteins.
Quels acide amine est impliquer dans la formation de ponts ?
la lysine
Quel est la concentration maximal du formaldehyde dans une solution aqueuse ?
40 %
Pour fixer on utilise quel concentration de formol ou formaldehyde ?
Formol à 10 % ou Formaldéhyde à 4 %
Comment en dilue le formaldehyde pour fixer ?
Une partie de formaldehyde 40% + 9 parties d’eau = Formaldéhyde 4% ou formol 10 %
Quel est la reaction de formol en solution aqueuse ?
CH2O + H2O = HOCH2OH (methylene glycol) ** anti-freeze
Combien longtemps ca prend la reaction du formol avec les proteins à devenir stable ? ** voir p. 22 et 23
18 à 24 heures
Quels sont les propriété du formaldehyde ?
Non coagulant, additive et tolerant
Quel est la reaction de formaldehyde avec les proteins ?
Il y a une reaction avec le groupe amine (NH2). Ceci bloque l’éosine ( ou colorant de groupe +) de faire une reaction avec le NH2
Quel est la reaction de formaldehyde avec les hydrates de carbones ?
Il les fixent pas, mais les préservent par emprissonnement
Quel est la reaction de formaldehyde avec les lipides ?
Ils sont preserves, mais sont perdu quand ils viennent en contact avec l’xylène et la paraffine
Comment vite le formaldéhyde pénetre et fixe ?
Il pénetre et additionne vite, mais fixe lentement (24 h)
Quels sont les avantages du formaldehyde ?
- Moins de rétrécissement
- Durcit le plus (sauf ethanol et acetone)
- Coute pas cher
- Versatile (permet de faire bcp de coloration)
Quel est le désavantage du formaldehyde ?
La coloration des elements nucléaires (exemple: l’éosine)
Le formol aqueux 10 % est t’il tamponné ?
non
Quel est le désavantage du formol aqueux 10 % ?
Il y a danger de pigment de formaline
Pourquoi on utilise le formol calcium et qu’est-ce qui est ajouté ?
- On ajoute le CaCl2
- Il est utilise pour fixer et preserver les phospholipides
Pourquoi on utilise le formol bromure d’ammoniun ?
Pour fixer les tissus du système nerveux
Quels sont les désavantages du formol bromure d’ammoniun ?
- Il est très acide, donc lyse les globules rouges et noyau
- Donne des faux positif avec la coloration APS
Quel est le meilleur remplacement pour le formol tamponné ?
Formol acetate
Quels sont les désavantage du formol 10%neutre ?
- Il deviant acide
- Il fait un pigment de formaline
Quel type de formol est plus populaire ?
Formol 10% neuter tamponné
Quels sont les avantages du formol alcoolique ?
- Augmente la vitesse de fixation
- Utilise dans la circulation, car déboute l’étape de déshydratation
** RT ** Comment en évite la poudre blanche du paraformaldehyde ?
On ajoute du methanol qui empêche ca formation
Quels sont les proprieties du glutaraldéhyde ?
Non coagulant, additive et tolerant
Quel colorant on ne peut pas utiliser avec le glutaraldéhyde ?
Le APS, car donne des faux positif
Quel est la reaction de glutaraldéhyde avec les hydrates de carbones ?
Il les fixent pas, mais les préservent par emprissonnement
Quel est la reaction de glutaraldéhyde avec les lipides ?
Ils sont preserves, mais sont perdu quand ils viennent en contact avec l’xylène et la paraffine
Comment vite le glutaraldéhyde pénètre et fixe ?
Il pénetre et fixe en meme temps, mais lentement
Quels sont les avantages du glutaraldéhyde ?
- Est bon pour la microscopie électronique
- Bon pour l’ultrastructure
Quels sont les désavantages du glutaraldéhyde ?
- Tendance à devenir intolerant
- Ne pénètre pas bien
- Instable quand exposé à l’oxygène
Quels sont les différents type de formol et explication de quelqu’un ?
- Formol 10% neuter tamponné : Tamponné à 7, si suivi de formaldehyde tamponné pour plus que 6 heures ca permet de faire de l’immunoperoxydase et ME, cesse la formation de pigments de formaline et fixe plus rapidement
- Formaline 10% (formaldehyde 4%)
- Formol salin: Recommandé en histo general et histochimique
- Formol calcium: Fixation des lipides
- Formol alcoolique: Augmente vitesse de fixation et glycogène mieux preserve et lyse des globules rouges
- Paraformaldéhyde
- Formaldéhyde phenol
Qu’est-ce qui peut causer le retracement ou gonflement des tissus en utilisant un fixateur et quel est la solution ?
- S’arrive quand on utilise un fixateur intolerant pour trop longtemps
Solution:
- Ne pas dépasser le temps (changer dans liquid d’entreposage si necessaire)
- Utiliser un fixateur tolerant
- Utiliser un fixateur compose qui a un ingredient contrecarre intolerance
Qu’est-ce que le problem de Desquamation avec un fixateur ?
On pert des cellules à la périphérie d’un tissu
Qu’est-ce que la cytolyse et l’autolyse dans la fixtion et quel est la solution ?
- C’est la nécrose du tissu si la fixation a commence trop tard
Solution:
- Mettre le tissu dans le fixateur aussitot que possible
- S’assurer que le fixateur est en contact avec toutes les surfaces
Qu’est-ce que la polyrisation du glycogène (effet de fuite) d’un fixateur et quel est la solution ?
- C’est la migration du glycogène du cytoplasme vers un pole de la cellule (meme à l’extérieur). Ceci peut se passer quand il y a une acidification d’un liquid (fixateur alcoolique)
Solution:
- Utiliser le bon fixateur pour le glycogène
Qu’est-ce que le problem de fixation par couche et quel est la solution ?
- C’est le ralentissement de la vitesse de penetration du fixateur dans le tissu (donc le dessus est bien fixer, l’intermédiaire est moyen et le milieu est mal fixer)
- impossible à corriger
Solution:
- Utilise un fixateur qui pénetre plus vite
- Utiliser des pièce plus mince
Qu’est-ce que la perte de structure ou detail (2) pour la fixation et quel est la solution ?
C’est une fixateur trop courte, donc les elements non fixer sont perdu dans la circulation
** Impossible à corriger
Solution:
- Allonger la période de fixation
C’est une congelation trop lente qui forme des cristaux et coupe les structure
Solution:
- S’assurer que le tissu refroidisse le plus rapidement possible
Quel est le but de la décalcification ?
Enlever le calcium
Quel est le fixateur recommandé pour la decalcification ?
Formaldéhyde 10% tamponné (2 à 5 jours)
Quels sont les 5 critères essentielles à une bonne decalcification ?
- Retrait complet du calcium
- Distorsion minimal du tissu: Donc utiliser la bonne concentration et garder le temps de decalcification au minimum
- Préservation des structures nucléaire: Perte de basophile nucléaire si trop longtemps
- Coloration subséquentes: Les acides peuvent extraire certaines substance qui render les coloration moins bonne
- Vitesse de decalcification raisonnable (ne pas utiliser de chaleur)
Quels sont les 5 étapes de la decalcification ?
- Sélection du specimen:
- 4 ou 5 mm d’épaisseur
- Surface qui a été couper doit être jeté après
- On coupe avec une scie à dents minces - Fixation du tissu:
- Tissu doit être bien fixé
- Certains fixateur peuvent être décalcifiant un peu
- Le fixateur de choix est le formal (sauf moelle osseuse Helley) - Décalcification:
- Acide fort
- Acide faible
- Résine échangeuse d’ions
- Agent chélateur - Fin de decalcification
- Vérification
* Processus physique (aiguille)
* Rayon x
* Processus chimique - Neutralisation de l’acide et lavage (pour empêcher le gonflement des fibres de collagène)
- Thiosulfates de sodium ou lithium 5% (12h)
- Lavage à l’eau courante
Quel est l’avantage d’utiliser un acide fort comme décalcifiant et quel est un exemple ?
Il agissent plus rapidement (utilise pour des bioposie d’urgence), c’est moins que 48h
Ex: L’acide nitirique :
- Pour éviter formation d’acide nitreux ajouté de l’urée 0.1% ou du formaldehyde 10%
- Pas conseiller pour moelle osseuse
Quel est l’avantage d’utiliser un acide faible comme decalcification et quel est un exemple ?
Le temps d’action est plus long (15 jours) et il conserve mieux les structures cellulaires
Ex: Acide formique:
- Le decalcification de choix (5 à 10)
- Doit changer le bain à chaque 24-48h
- A 25% agit rapide, mais solution deviant trouble
Ex: Acide picrique:
- Pour les petites pieces
- Bon pour les colorations
Comment la résine échangeuses d’ions fonctionne pour la decalcification ?
- On place un tissu dans une solution décalcifiante acide avec la résine qui va capter les ions de calcium, donc la solution est toujours libre de calcium et on n’est pas oubliger de la changer.
- C’est plus lent (20 jours)
- Impossible d’utiliser la method chimique pour voir si decalcification est terminé
Quel est la method d’électrolyse pour la decalcification ?
- C’est la migration des ions de calcium par le courant électrique
- Prend 2 à 6 heures
- Faut laver tissu dans solution alkaline pour neutrliser l’acide
Quel est la method de chélateur pour la decalcification ?
C’est la combinaison du calcium avec l’EDTA qui forme un complex non ionises et solubles. C’est un action lente pour les petits tissu, mais bon.
Comment on fait pour dire avec la method de rayon x s’il y a encore du calcium ?
- Des zones blanchatre veut dire que ce n’est pas décalcifier
- Il faut éviter la fixation avec le mercure, car rend tissu radio-opaque
Quels sont les procedure physique pour la fin de la decalcification ?
- Torsion du tissu: Plier le tissu
- Aiguille
- Coupe avec bistouri (scapel)
Quel est la procedure chimique pour la fin de la decalcification ?
On met le tissu dans une solution fraiche de décalcifiant pour 3h. Ensuite en ajoute 5ml du liquid décalcifiant avec de l’hydroxyde d’ammonium ou sodium (rend pH alcalin) et ensuite en ajoute de l’oxalate d’ammonium ou sodium.
- Si elle reste clair la decalcification est terminé
- Si elle deviant trouble il y a encore du calcium
Quels sont les facteurs qui influence la decalcification ?
- Fixation: Doivent être bien fixer
- Concentration: Plus concentrer = plus vite= plus de risqué
- Volume du liquid: 20 pour 1
- Température: Peut accélerer la vitesse, mais cause des gonflemments
- Agitation: Modifie pas
- Vide: Accélere la reaction, car enlève bulle d’air
- Durée: pas laisser plus longtemps qu’il faut
Quel sont les trois étapes de la circulation ?
- Déshydratation
- éclaircissement
- Imprégnation
Quel est le but de la déshydratation ?
Enlever l’eau et le fixateur du tissu
Quel sont les bains qu’on utilise et comment ca fonctionne pour la déshydratation ?
- Alcool 70% (30% cerveau) (change chaque fois)
- Alcool 90% (change chaque fois)
- Alcool 100 % (enlève)
- Alcool 100%
- Alcool 100% (ajoute un nouveau)
* 3 dernier rotation
Pourquoi le premier bain de déshydration est 70% ?
Pour éviter le stress du tissu
Qu’est-ce que on ajoute dans le dernier bain pour s’assurer qu’il n’y a plus d’eau dans le tissu ?
Sulfate de cuivre anhyde, tourney bleu s’il y a encore de l’eau. Il accélère aussi la déshydratation et prolonge la durée d’alcool
Quels sont les 8 facteurs qui influence la déshydratation ?
- Concentration (bains croissant)
- Volume: 20-50 fois supérieur au tissu
- Agitation: Augmente la vitesse
- Durée: Assez longtemps pour retirer l’eau, mais pas trop longtemps pour causer un rétrécissement et durcissement
- Température: Augmente la vitesse
- Vide partiel: Augement la vitesse
- Présence de sulfate de cuivre: Dit si dernier bain est contaminé et augmente la vitesse
- Taille du tissu: Plus gros, fibreux et dense qu’il est plus de chance que l’eau reste dans le tissu
Quel est le but le l’éclaircissement ?
Retirer l’agent déshydratant
Quel sont les bains pour l’éclaircissement ?
Plusieurs bains de meme concentration
Que faut faire l’agent d’éclaircissement ?
Doit être miscible avec l’acool et la parafinne et doit pouvoir enlever l’acool des tissus
Quel doit être le volume de l’agent d’éclaircissement ?
10 fois supérieur
L’éclaicissement est necessaire pour quel autre technique ?
la coloration pour enlever la paraffine
Quels sont les 7 facteurs qui influencent l’éclaircissement ?
- Concentration: Bains
- Volume: 10 fois plus que volume de pièce
- Agitation: Augmente la vitesse
- Durée: Dépend de l’agent
- Température: Augemente la vitesse, mais durcit et retracte, donc mieux sans chaleur
- Vide partiel: Aucun changement
- Taille: Plus gros, fibreux et dense qu’il est plus de chance que l’eau reste dans le tissu
Quel est le but de l’imprégation ?
Fournir un support interne au tissu et remplacer l’xylène par la paraffine
Si le bloc de paraffine sens comme l’xylène qu’est-ce que le problem ?
L’imprégnation à mal été faite
Comment les bains d’impréganation fonctionne ?
On fait la rotation des bains,car le premier est dilué avec de l’xylène
Avec quel agent d’éclaircissement qui faut augmenter la duré d’imprégnation ?
L’huile de cèdre, chloroforme et tétrachlorure, car plus difficile à remplacer par la paraffine
Le temps d’imprégnation est plus long pour quel tissu ?
Les tissus denses (os, peau, SNC)
Le temps d’imprégnation est plus court pour quel tissu ?
Les tissus mous (foie, muscle, tissu fibreux)
A quel temperature doit être la paraffine ?
2 à 3 degree plus élevé que le point de fusion
Quels sont les 6 facteurs qui influence l’imprégnation ?
- Taille de la pièce: Plus long pour tissu qui sont dense, gros et dure
- Agent éclaircissement utilise : Plus vite si miscible avec paraffine
- Volume: mieux si plusieurs bain de paraffine
- Température: Entre 57-60 degree Celcius
- Agitation: Plus efficace
- Vide partiel: Fait évacuer bulle d’air dans tissu et paraffine entre mieux
