HC 8 - Metabolomics: Experiment to Data Flashcards
Hoorcollege 8
Wat is een detector?
Een converter die een fysieke kwantiteit meet (temperatuur, druk, licht) en deze converteert in een signaal (voltage, stroom) die kan worden afgelezen door een elektronisch instrument (computer, multimeter)
Thermocouple
Coverteert temperatuur in een output voltage (spanning) die met een voltmeter kan worden afgelezen.
Seebeck effect
De grootte van de voltage is afhankelijk van het verschil in temperatuur bij de junction
Hoe werkt de sensor in de camera van de telefoon?
Lichtgevoelige cel (chip)
> licht omzetten naar een voltage en met een AD converter kan het naar een digitaal signaal worden omgezet als een pixel van een foto/afbeelding
Verschil tussen CMOS en CCD sensoren / chips
De technologie verschilt maar het principe is hetzelfde
Biologisch signaal naar data
> Biologisch signaal
- Detector
Elektrische signaal
- AD converter
digitaal signaal (binair)
- data
Bij Sanger Sequencing is het biologische signaal …
Fluorescentie (bij automatische Sanger)
Sanger metingen (welke detector wordt gebruikt?)
Photomultiplier: deze kan een foton in een elektrisch signaal omzetten
> gelabelde nucleotidesequenties van een capillair gaan één voor één door een laser
> fluoresceren van de nucleotide
> detector
> photomultiplier (naar elektrisch signaal)
> AD converter
> digitaal signaal
Hoe heet de techniek van meten die hoort bij NGS?
Roche 454 pyrosequencing
(skip) Roche 454 pyrosequencing materialen
-CCD camera: zet elektromagnetische straling (incl kleur) om in elektrisch signaal
-Er wordt een slide gebruikt met alle DNA/RNA parallel sequencing (zoals Illumina)
(skip) Roche 454 pyrosequencing workflow
-Plaatsen adapters (dsDNA) aan fragmenten DNA/RNA
-Beads waarop de fragmenten vastgezet worden
-Amplificatie DNA fragmenten (bridge)
-Laden beads op slide
-Slide in de sequencer waarin een CCD camera zit
-Inbouwen nucleotiden (1-voor-1)
-Fluorescentie en maken foto van hele slide
-Stapel van foto’s aflezen in verticale richting
Ionendetectie met massaspectrometrie
Meten ionen via een detector
-Microchannel plate [convertie ion naar elektron signaal]
-Scintillator [naar foton]
-PMT: Photomultiplier tube [naar elektrisch signaal/stroom]
-AD converter [naar digitaal signaal]
-Computer: analyse
Signal
Bedraagt informatie over de kwantiteit van interesse.
Noise
Ongewilde vreemde informatie die we niet willen en moeten weghalen
- ruis verlaagt het signaal-naar-ruis ratio
- plaatst een laag (lower) limiet op de hoeveelheid van kwantiteit die kan worden gedetecteerd (detection limit)
- verlaagt accuratie en precisie van de meting
Wat is ruis en waarvan is het afhankelijk (inherent) bij metingen?
Willekeurige fluctuaties die in een signaal voorkomen en die inherent zijn in de combinatie van instrument en methode (daarvan is het afhankelijk)
> verwijderen
Ruisbronnen extern
Externe bronnen
- Omgevingsruis
- Temperatuur, power lines, zelfs menselijke activiteit
Ruisbronnen in proteomics
-Chemische ruis
-Elektronische ruis
-Foton ruis
-Neutrale ruis: neutrale Heliumionen op de detector
Wat is MALDI?
Bij MALDI (ionisatiemethode) worden moleculen op een matrix geladen (een compound die de formatie van ionen promoot) en bij bestraling met een laser excitatie en lading meegeven aan de moleculen en er wordt per pixel gemeten waardoor je spatiale info krijgt.