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S.2 Bio Molecular > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

1
Q

¿Qué es el DNA recombinante?

A

Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente

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Q

¿Qué son las enzimas de restricción?

A

Son un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de DNA foráneo
-> corta el vector de DNA y el inserto de DNA en sitios específicos para permitir la ligación

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Q

¿Qué hacen las enzimas de restricción? (2)

A

-Degradan el DNA extraño
-No degradan el DNA propio de la bacteria

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4
Q

¿De qué se encargan las enzimas de restricción?

A

Monitorean el DNA que entra a la célula y lo destruyen si lo reconocen como malo

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Q

Son las que degradan el DNA extraño, reconocen una secuencia y cortan el DNA

A

Endonucleasas

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6
Q

E. Coli tiene sus propias enzimas de restricción
las pseudomonas y cada bacteria tiene sus propias enzimas

A
  • 1º.- primera letra del género de la bacteria (escherichia)
  • 2 y 3º.- nombre de la especie (coli)
    4ta letra es la cepa (RY13)
    -> Número romanos: de acuerdo a conforme se fueron encontrando
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7
Q

Es un sistema de defensa natural de las bacterias.

A

Enzimas de restricción

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8
Q

Tipos de enzimas de restricción

A

Endonucleasas
Enzimas del sistema de modificación

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9
Q

Caract. de las enzimas del sistema de modificación

A

Metilasas: modificar el ADN propio para que no sea degradado -> El ADN metilado es inmune, sino sería degradado.

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10
Q

Modifican el DNA propio para que no sea degradado

A

Metilasas

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11
Q

Tipo I de enzimas de restricción caract.

A

Reconoce que debe de cortar -> es asimétrico
el sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento,
1000 pares de bases

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12
Q

Enzima de restricción Tipo II caract.

A

-Reconoce el sitio y ahí mismo hace el corte
-Son secuencias palindrómicas -> se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos (ADN o ARN) que posee simetría al leerse igual en ambas direcciones

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13
Q

El sitio de reconocimiento es igual al sitio de corte ¿De qué tipo de enzima de restricción estamos hablando?

A

Tipo II

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14
Q

Enzima de restricción Tipo III caract.

A

Reconoce el sitio pero corta 20 -30 pares de bases de distancia en relación con la secuencia -> son asimétricos

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15
Q

Enzima de restricción Tipo IV caract.

A

Reconoce DNA metilado

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16
Q

¿Qué tipo de enzima de restricción usaríamos en lab y por qué?

A

Tipo II -> porque es específica, si queremos cortar un gen lo queremos cortar ahí mismo, no 1000 pares de bases para allá

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17
Q

¿Qué hacen las endonucleasas? (2)

A

1- Cortan enlaces fosfodiéster del DNA en secuencias específicas
2- Reconocen secuencias palindrómicas
-> producidas por las bacterias las endo

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18
Q

Tipos de cortes de las enzimas de restricción (2)

A

Cohesivos
Romos

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19
Q

¿Cómo son los cortes cohesivos?

A

Son asimétricos
Cortes en diferente posición
3 a 5 nt de diferencia

20
Q

¿Cómo son los cortes romos?

A

Cortes simétricos en ambas cadenas

21
Q

Es una pequeña molécula de ADN circular distinta del ADN cromosómico que posee la capacidad única de replicarse de forma independiente duda?

A

Plásmido -> este se le pone a la bacteria, vamos a tener varios fragmentos mediante ligasa para unir enlaces fosfodiéster y tenemos el plásmido combinado (DNA recombinante) -> este se le pone a la bacteria

22
Q

Para que mi plásmido funcione como vector debe tener

A

ori, gen de resistencia antibiótica y una región palindrómica

23
Q

Molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

A

Vector -> Ej: plásmido y bacteriófagos

24
Q

Tipos de vectores (2)

A

Clonación y Expresión (genera proteína)

25
¿Qué nos permite la clonación?
Viene de una misma célula Nos permite almacenar secuencias y obtener grandes cantidades de DNA
26
¿Qué permite la expresión?
Producir un transcrito o proteína -> debe generar una proteína
27
En la clonación que ocupamos?
-Plásmido ocupa un punto de origen (prok solo tiene uno) -> para poder separar las hebras y se replica -Sitio múltiple de clonación (secuencias palindrómicas) -Marcador de selección
28
¿Qué es el sitio múltiple de clonación?
Es donde están secuencias palindrómicas -> para poder cortar con enzimas de restricción -> Va a ser una secuencia especifica que es reconocida por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario
29
Características de los marcadores o marcaje de selección
-Podemos poner gen que le de resistencia a un antibiótico a mi bacteria -Podemos poner un gen para que se ponga de un color diferente la bacteria -O ponerle una enzima para que mi bacteria pueda tomar alimento (β-galactosidasa) -> dependiendo del marcaje que yo le ponga voy a modificarla,
30
Cuando la bacteria agarre mi plásmido va a tener el gen que tu quieres y el gen de resistencia a la penicilina, ponemos medio de cultivo que tenga penicilina para que todas esas bacterias que no agarraron tu plásmido se mueran **Entender**
En la práctica tenemos marcaje de selección que es resistencia al antibiótico -> ponemos medio de cultivo, ponemos plásmido - lo pasamos a una placa que tiene un antibiótico - si el plásmido tuvo un gen de resistencia a una penicilina y nosotros ponemos medio de cultivo que tenga penicilina - a las bacterias que no tienen su gen se mueren -> todas aquellas bacterias que no tiene el gen del marcaje se petatean -> y así sabemos que la bacteria ya tiene su plásmido
31
Todo plásmido que tiene (3)
Punto de origen (separa hebras) Sitio múltiple de clonación (palindromicas) Marcador de selección
32
En la expresión qué ocupamos
Punto ori para separar hebras Sitio múltiple de clonación dónde están las secuencias palindrómicas Marcador de selección para ver si tiene plásmidos Promotor (NO ES TATA) -> para realizar transcripción RNAm ocupa CAP y poliA -> al ser bacteria no tiene CAP tiene **sitio de unión a ribosoma** para que se pueda traducir y tiene secuencia de poliA
33
Características de los plásmidos (3)
dsDNA Circulares Separados del DNA cromosómico
34
Son virus que infectan a las bacterias
Bacteriófagos
35
Plásmido y bacteriófago diferencias
Plásmido es pequeño, metemos genes más pequeños. Los bacteriófagos nos permite mayor cantidad de nt -> SI tenemos pedazo de gen grande lo puedo usar con un bacteriófago
36
¿Qué hacen los bacteriófagos cuando se modifican genéticamente?
Eliminan genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento -> modificamos genéticamente el gen (DNA) del bacteriófago y lo introducimos nuevamente
37
Son vectores híbridos
Cósmidos
38
Cósmidos caract
Alberga gen más grande: agarramos plásmido, ponemos gen muy grande -> al no poderse enrollar le ponemos pequeños fragmentos que vienen del bacteriófago (sitios cos) -> permiten que se vuelva a doblar o empaquetar el DNA y ya puede entrar en la cabecita del bacteriófago
39
sitios cos qué permite?
Permiten que se vuelva a doblar o empaquetar el DNA y ya puede entrar en la cabecita del bacteriófago
40
Fagémidos caract.
Plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago (que sea totalmente lineal , gen más grande y buscamos bacteriófago que pueda albergar este tamaño de gen **No tienen sitios cos**
41
Cromosomas artificiales
BAC -> agarramos DNA cromosómico, se lo quitamos a la bacteria, lo modificamos para que solo tenga el gen que yo quiero -> y lo volvemos a poner a la bacteria YAC -> usamos levadura (cel euk) quitamos DNA, lo modificamos y se lo volvemos a insertar y la levadura hace lo que nosotros queramos
42
Molécula de DNA circular utilizado para la replicación y expresión de un gen clonado en estudios de ADN recombinante
Plásmidos
43
Tipo de vector que combina las propiedades de un plásmido y un fago, permitiendo la eficiencia de un vector de fago con la versatilidad y facilidad de uso de un plásmido
Cósmido
44
Tipo de vector que incluye un origen de la replicación, un sitio múltiple de clonación y un marcador de selección
Clonación
45
Proceso utilizado para identificar células que han sido transformadas exitosamente con DNA recombinante
Selección
46
Tipo de vector utilizado específicamente para la producción de proteínas en un organismo huésped
Expresión
47
Método utilizado para separar moléculas de DNA recombinante de acuerdo a su tamaño mediante un campo eléctrico
Electroforesis

S.2 Bio Molecular (24 decks)

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