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S.2 Bio Molecular > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

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1
Q

¿Qué es el DNA recombinante?

A

Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente

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Q

¿Qué son las enzimas de restricción?

A

Son un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de DNA foráneo
-> corta el vector de DNA y el inserto de DNA en sitios específicos para permitir la ligación

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Q

¿Qué hacen las enzimas de restricción? (2)

A

-Degradan el DNA extraño
-No degradan el DNA propio de la bacteria

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4
Q

¿De qué se encargan las enzimas de restricción?

A

Monitorean el DNA que entra a la célula y lo destruyen si lo reconocen como malo

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5
Q

Son las que degradan el DNA extraño, reconocen una secuencia y cortan el DNA

A

Endonucleasas

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6
Q

E. Coli tiene sus propias enzimas de restricción
las pseudomonas y cada bacteria tiene sus propias enzimas

A
  • 1º.- primera letra del género de la bacteria (escherichia)
  • 2 y 3º.- nombre de la especie (coli)
    4ta letra es la cepa (RY13)
    -> Número romanos: de acuerdo a conforme se fueron encontrando
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7
Q

Es un sistema de defensa natural de las bacterias.

A

Enzimas de restricción

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8
Q

Tipos de enzimas de restricción

A

Endonucleasas
Enzimas del sistema de modificación

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9
Q

Caract. de las enzimas del sistema de modificación

A

Metilasas: modificar el ADN propio para que no sea degradado -> El ADN metilado es inmune, sino sería degradado.

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10
Q

Modifican el DNA propio para que no sea degradado

A

Metilasas

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11
Q

Tipo I de enzimas de restricción caract.

A

Reconoce que debe de cortar -> es asimétrico
el sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento,
1000 pares de bases

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12
Q

Enzima de restricción Tipo II caract.

A

-Reconoce el sitio y ahí mismo hace el corte
-Son secuencias palindrómicas -> se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos (ADN o ARN) que posee simetría al leerse igual en ambas direcciones

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13
Q

El sitio de reconocimiento es igual al sitio de corte ¿De qué tipo de enzima de restricción estamos hablando?

A

Tipo II

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14
Q

Enzima de restricción Tipo III caract.

A

Reconoce el sitio pero corta 20 -30 pares de bases de distancia en relación con la secuencia -> son asimétricos

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15
Q

Enzima de restricción Tipo IV caract.

A

Reconoce DNA metilado

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16
Q

¿Qué tipo de enzima de restricción usaríamos en lab y por qué?

A

Tipo II -> porque es específica, si queremos cortar un gen lo queremos cortar ahí mismo, no 1000 pares de bases para allá

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17
Q

¿Qué hacen las endonucleasas? (2)

A

1- Cortan enlaces fosfodiéster del DNA en secuencias específicas
2- Reconocen secuencias palindrómicas
-> producidas por las bacterias las endo

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18
Q

Tipos de cortes de las enzimas de restricción (2)

A

Cohesivos
Romos

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19
Q

¿Cómo son los cortes cohesivos?

A

Son asimétricos
Cortes en diferente posición
3 a 5 nt de diferencia

20
Q

¿Cómo son los cortes romos?

A

Cortes simétricos en ambas cadenas

21
Q

Es una pequeña molécula de ADN circular distinta del ADN cromosómico que posee la capacidad única de replicarse de forma independiente duda?

A

Plásmido -> este se le pone a la bacteria, vamos a tener varios fragmentos mediante ligasa para unir enlaces fosfodiéster y tenemos el plásmido combinado (DNA recombinante) -> este se le pone a la bacteria

22
Q

Para que mi plásmido funcione como vector debe tener

A

ori, gen de resistencia antibiótica y una región palindrómica

23
Q

Molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

A

Vector -> Ej: plásmido y bacteriófagos

24
Q

Tipos de vectores (2)

A

Clonación y Expresión (genera proteína)

25
Q

¿Qué nos permite la clonación?

A

Viene de una misma célula
Nos permite almacenar secuencias y obtener grandes cantidades de DNA

26
Q

¿Qué permite la expresión?

A

Producir un transcrito o proteína -> debe generar una proteína

27
Q

En la clonación que ocupamos?

A

-Plásmido ocupa un punto de origen (prok solo tiene uno) -> para poder separar las hebras y se replica
-Sitio múltiple de clonación (secuencias palindrómicas)
-Marcador de selección

28
Q

¿Qué es el sitio múltiple de clonación?

A

Es donde están secuencias palindrómicas -> para poder cortar con enzimas de restricción
-> Va a ser una secuencia especifica que es reconocida
por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario

29
Q

Características de los marcadores o marcaje de selección

A

-Podemos poner gen que le de resistencia a un antibiótico a mi bacteria
-Podemos poner un gen para que se ponga de un color diferente la bacteria
-O ponerle una enzima para que mi bacteria pueda tomar alimento (β-galactosidasa)
-> dependiendo del marcaje que yo le ponga voy a modificarla,

30
Q

Cuando la bacteria agarre mi plásmido va a tener el gen que tu quieres y el gen de resistencia a la penicilina, ponemos medio de cultivo que tenga penicilina para que todas esas bacterias que no agarraron tu plásmido se mueran Entender

A

En la práctica tenemos marcaje de selección que es resistencia al antibiótico -> ponemos medio de cultivo, ponemos plásmido - lo pasamos a una placa que tiene un antibiótico - si el plásmido tuvo un gen de resistencia a una penicilina y nosotros ponemos medio de cultivo que tenga penicilina - a las bacterias que no tienen su gen se mueren -> todas aquellas bacterias que no tiene el gen del marcaje se petatean -> y así sabemos que la bacteria ya tiene su plásmido

31
Q

Todo plásmido que tiene (3)

A

Punto de origen (separa hebras)
Sitio múltiple de clonación (palindromicas)
Marcador de selección

32
Q

En la expresión qué ocupamos

A

Punto ori para separar hebras
Sitio múltiple de clonación dónde están las secuencias palindrómicas
Marcador de selección para ver si tiene plásmidos
Promotor (NO ES TATA) -> para realizar transcripción
RNAm ocupa CAP y poliA -> al ser bacteria no tiene CAP
tiene sitio de unión a ribosoma para que se pueda traducir y tiene secuencia de poliA

33
Q

Características de los plásmidos (3)

A

dsDNA
Circulares
Separados del DNA cromosómico

34
Q

Son virus que infectan a las bacterias

A

Bacteriófagos

35
Q

Plásmido y bacteriófago diferencias

A

Plásmido es pequeño, metemos genes más pequeños.
Los bacteriófagos nos permite mayor cantidad de nt
-> SI tenemos pedazo de gen grande lo puedo usar con un bacteriófago

36
Q

¿Qué hacen los bacteriófagos cuando se modifican genéticamente?

A

Eliminan genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento
-> modificamos genéticamente el gen (DNA) del bacteriófago y lo introducimos nuevamente

37
Q

Son vectores híbridos

A

Cósmidos

38
Q

Cósmidos caract

A

Alberga gen más grande: agarramos plásmido, ponemos gen muy grande -> al no poderse enrollar le ponemos pequeños fragmentos que vienen del bacteriófago (sitios cos) -> permiten que se vuelva a doblar o empaquetar el DNA y ya puede entrar en la cabecita del bacteriófago

39
Q

sitios cos qué permite?

A

Permiten que se vuelva a doblar o empaquetar el DNA y ya puede entrar en la cabecita del bacteriófago

40
Q

Fagémidos caract.

A

Plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago (que sea totalmente lineal , gen más grande y buscamos bacteriófago que pueda albergar este tamaño de gen
No tienen sitios cos

41
Q

Cromosomas artificiales

A

BAC -> agarramos DNA cromosómico, se lo quitamos a la bacteria, lo modificamos para que solo tenga el gen que yo quiero -> y lo volvemos a poner a la bacteria
YAC -> usamos levadura (cel euk) quitamos DNA, lo modificamos y se lo volvemos a insertar y la levadura hace lo que nosotros queramos

42
Q

Molécula de DNA circular utilizado para la replicación y expresión de un gen clonado en estudios de ADN recombinante

A

Plásmidos

43
Q

Tipo de vector que combina las propiedades de un plásmido y un fago, permitiendo la eficiencia de un vector de fago con la versatilidad y facilidad de uso de un plásmido

A

Cósmido

44
Q

Tipo de vector que incluye un origen de la replicación, un sitio múltiple de clonación y un marcador de selección

A

Clonación

45
Q

Proceso utilizado para identificar células que han sido transformadas exitosamente con DNA recombinante

A

Selección

46
Q

Tipo de vector utilizado específicamente para la producción de proteínas en un organismo huésped

A

Expresión

47
Q

Método utilizado para separar moléculas de DNA recombinante de acuerdo a su tamaño mediante un campo eléctrico

A

Electroforesis

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