Cours 9 - méthodes en immunologie

Question 1

Anticorps monoclonale

Answer 1

Reconnait un seul épitope du même antigène

Question 2

Anticorps polyclonale

Answer 2

reconnait plusieurs épitopes du même antigène

Question 3

Anticorps primaire

Answer 3

Reconnait un antigène quelconque

Question 4

Anticorps secondaire

Answer 4

Reconnait la portion Fc d’un anticorps d’une espèce différente

Question 5

ELISA

Answer 5

Enzyme-linked immunosorbent assay

Question 6

Fonction d’ELISA

Answer 6

Détecter et quantifier des molécules à partir de mélanges complexes

Question 7

Étapes ELISA

Answer 7

• L’antigène immobilisé sur une surface solide
• Un anticorps spécifique de l’antigène est ajouté afin de détecter l’antigène
• L’enzyme couplée à l’anticorps catalyse une réaction colorée qui peut être quantifiée à l’aide d’un spectrophotomètre

Question 8

Western blot fonction

Answer 8

Détecter, quantifier et caractériser des protéines et leurs modifications post-traductionnelles

Question 9

Étapes Western Blot

Answer 9

• Un mélange de prots séparé par électrophorèse de gel et transféré sur une membrane de nitrocellulose
• un anticorps spécifique de l’ag recherché est ajouté afin de détecter l’ag
• l’enzyme couplée à l’anticorps catalyse une réaction luminescente qui peut être visualisée sur film

Question 10

3 types d’essais cellulaires (chose identifiée)

Answer 10

Relargage de chrom51 (cytotoxicité)
Prolifération:
Marquage radioactif
marquage fluorescent

Question 11

Essai de relargage de chrom51 (utilité, fonctionnement)

Answer 11

• Pour mesurer la fonction des TCL ou des NK
• Chrome sur cellules cibles, si activitée cytotoxique, plus de chrome

Question 12

Marquage radioactif

Answer 12

• cellules induites à proliférer
• des nucléotides radioactifs sont ajoutés au milieu de la culture
• Les cellules incorporent la thymidine tritiée dans leur ADN à chaque cycle de réplication
• Après plusieurs jours, les cellules sont collectées et lysées, et la radioactivité est quantifiée

Question 13

Marquage fluorescent

Answer 13

• Les cellules sont marquées avec un fluophore cytoplasmique (CFSE)
• Les cellules sont induites à proliférer
• Lors de chaque division, chaque cellule-fille retient la moitié du fluophore
• Après plusieurs jours, les cellules sont collectées, fixées, et analysées par cytométrie en flux

Question 14

Cytométrie en flux (fonction, étapes

Answer 14

Caractériser et compter des cellules ou des particules
Étapes:
- une suspension de cellules isolées passe devant un laser
- des photomultiplicateurs détectent, pour chaque cellule: La lumière dispersée, la fluorescence émise

Question 15

Cytométrie en flux sur cellules non-marquées

Answer 15

• En passant devant le laser, une cellule diffracte le faisceau lumineux :
  => En fonction de sa taille : Forward scatter (FSC)
  => En fonction de sa granularité : Side scatter (SSC)

Question 16

Cytométrie en flux - histogramme mono-paramétrique

Answer 16

représente une seule caractéristique d’une population de cellules

Question 17

Cytométrie en flux - scatter-plot

Answer 17

représentent des données multiparamétriques

Question 18

Cytométrie en flux sur cellules marquées (marquées par quoi, résultat)

Answer 18

• cellules marquées par des anticorps couplés à des fluophores
• cellules portant l’antigène recherché fixera le complexe anticorps-fluophoreet émet la fluorescence correspondante

Question 19

FACS (fonction, mécanisme)

Answer 19

• Les cellules sont chargées en fonction de leur profil fluorescent
• Les cellules ayant reçu une charge sont dérivées entre les plaques déflectrices
• Le FACS permet de générer des populations de cellules hautement purifiées