Cours 18 - analyse et utilisation des cellules souches

Question 1

4 outils d’imagerie pour étudier la différenciation des CSE

Answer 1

• Immunofluorescence
• RNA Fluorescence in Situ Hybridation (RNA FISH)
• Constructions promoteur-rapporteur
• Traçage du destin in vivo

Question 2

Pourquoi utiliser anticorps pour immunofluorescence ?

Answer 2

molécule qui peut se lier spécifiquement à la protéine que nous voulons étudier
pour pouvoir la marquer

Question 3

étapes de l’immunofluoresence

Answer 3

• Fixation avec formaldéhyde
• Perméabilisation de la membrane pour marquer des prots intracellulaires
• Incubation avec ag primaire
• Lavage de l’excès d’ac
• incubation avec ac 2ndaire marqué
• lavage de l’excès c’ac
• imagerie

Question 4

Pour marquer le noyau cellulaire

Answer 4

DAPI bleu

Question 5

RNA fish (mécanisme et but)

Answer 5

• Plusieurs petites molécules d’ADN simple brin
  complémentaires de la même molécule d’ARNm et
  marquées par des molécules fluorescentes (la sonde)
  sont hybridées (= liées par la complémentarité des
  bases) à leur ARNm cible
• Permet de localiser et compter les molécules d’ARNm

Question 6

But RNA fish avec code barre

Answer 6

Visualisation de transcriptome entier de chaque
cellule

Question 7

on peut utiliser GFP comme …

Answer 7

Utilisation de la GFP comme gène rapporteur spécifique à un type cellulaire

Question 8

Suivi de la différenciation cellulaire au cours du temps par GFP

Answer 8

Le promoteur actif dans un type de cellule spécifique
permet de suivre la différenciation par imagerie en fluorescence

Question 9

Suivi in vivo des cellules souches avec transplantation fonctionnement

Answer 9

Des cellules particulières d’une souris GFP peuvent être isolées et transplantées dans une souris non-GFP
-> Cela permet de suivre le sort des cellules transplantées

Question 10

Confetti mouse, conséquence sur la descendance

Answer 10

La descendance de chaque cellule est marquée d’une couleur différente

Question 11

Brainbow mouse mécanisme

Answer 11

On a inséré une séquence d’ADN codant pour plusieurs protéines fluorescentes
dans le génome d’une souris, sous le contrôle d’un promoteur actif uniquement
dans le cerveau
La Cre recombinase permute au hasard des parties de cette séquence
de sorte qu’une seule des protéines fluorescentes soit exprimée
-> Chaque permutation entraîne l’expression d’une seule protéine
fluorescente

Question 12

Outil pour étudier l’embryogenèse

Answer 12

CSE

Question 13

Quelles cellules pour modéliser les maladies

Answer 13

cellules souches pluripotentes

Question 14

PB avec les cellules dérivées du patient

Answer 14

• Les patients diffèrent les uns des autres non seulement par leur maladie mais aussi à des millions d’autres positions du génome
• Chaque lignée cellulaire iPS du même patient se comporte différemment