Clase 5 C Flashcards
Contenido C+G
Para que sirve
Proporcion de guanina y citosina en una secuencia de ARN y ADN
Calcular temperaturas para el PCR
Variación GC
Mayor a 5, probablemente especies diferentes
Mayor a 10 probablemente generos diferentes
Contenido G+C es taxonomía …
Taxonomia molecular
Hibridación de ácidos nucleicos
Se separan las hebras de genomas distintos y se unen para ver el porcentaje de unión
Mas alto el porcentaje de hibridación mas cercanas son
Porcentaje de hibridación para considerarlo misma especie
Mayor a 70 porciento
Analisis filogenéticos
Hipótesis acerca de las relaciones evolutivas y determinan relaciones de parentesco
Comparación de secuencias de ADN o ARN. En este caso es ARN ribosomal
Que genes escoger para filogenia
1 No influenciado por transferencia horizontal de género
2 Distribución universal, por eso se eligio ARN ribosomal
3 Función homologa en todos los MO
4 Cantidad de info suficiente
5 Tamaño adecuado
6 Copia unica en el genoma, si hay mas copias piede haber variabilidad
7 Se utilizan basados en el ADN ribosomal 16S y genes de proteinas esenciales como 23S y 5S
Genes utilizados para la secuenciación bacteriana
ADN ribosomal
16S de la subunidad menor
23S y 5S, genes que codifican para proteinas de la subunidad mayor
Tecnica de secuenciación para genes pequeños
Tecnica de Sanger
Amplificacion y marcado, tecnica de secuenciación
1 Generan PCRs de diferentes tamaño
2 En cada PCR se marca un nucleotido. Cada marcador determina el punto final de cadena
3 Separan y detectan fragmentos, los framentos mas cortos bajan primero, laser detecta esos fragmentos y a medida que se suman los marcadores de los fragmentos de mayor longitud se forma la secuencia. Secuencia registra estos picos de diferentes colores que seran nucleotidos distintos
4 Interpreta la secuencia
Cuando recurrir a secuenciación en el laboratorio clínico
Tecnica MALDI TOF genera un perfil de proteinas ionizado, si el resultado es solo del 70 porciento, se realizan pruebas bioquímicas tradicionales, si no ahi SECUENCIACIÓN
Al ingresar una secuencia de ADN a una base de datos pueden surgir 2 resultados:
Menor a 3 porciento de diferencia: nueva cepa, misma especie
Mayor a 3 porciento: candidata a nueva especie
Fingerprinting
Genes Housekeeping (5) mas secuencia 16S seria la huella de la especie
Descripción de una nueva especie, necesita criterios:
/3
Morfológicas
Fenotípicas
Genéticas