Chapitre 8 Flashcards
Vrai ou faux. Les phages sont essentiels au maintien de l’équilibre écologique de la biosphère.
Vrai.
Expliquez le processus de clonage avec le phage lambda.
La partie du génome non-essentielle à la multiplication virale dans un cycle lytique, soit les gènes de lysogénie, sont retirés et remplacés par des séquences exogènes qui seront propagés avec le génome viral. Ces vecteurs lambda sont donc strictement lytique, et produisent des plages claires.
L’encapsidation se fait par un mécanisme spécifique dans lequel les concatémères sont reconnus par une protéine virale.
Expliquez les deux méthodes de criblage faites à partir du phage lambda.
1- Identification de clones par leur homologie à une séquence nucléotidique. Réplique sur membrane de nitrocellulose, et transfert de matériel contenu sur la plage. Hybridation moléculaire d’un fragment d’ADN marqué, et reconnaissance des plages qui ont la séquence complémentaires. Les plages positives sont récupérés et les phages multipliés.
2- Dans le deuxième cas, on peut identifier les clones par production de protéines contre laquelle on dispose d’un Ac. Il y a aussi réplication sur membrane de nitrocellulose. On peut coupler l’Ac à un enzyme détectable par son activité et détecter les plages positives, exprimées uniquement chez les patients atteints d’une maladie par exemple.
Quelle caractéristique du phage T7 est utilisée en biologie moléculaire? De quelles manières peut-on l’utiliser?
Le génome du phage T7 possède une pol ARN très active et très spécifique pour la reconnaissance du promoteur viral tardive.
On peut l’utiliser avec transcription in vitro et vecteurs d’expression
Expliquez comment on peut utiliser la polymérase ARN du phage T7 pour faire de la transcription in vitro.
En utilisant le promoteur et la polymérase ARN puissante du phage T7, qui est en plus très spécifique, on peut transcrire un gène cloné placé après le promoteur induit dans un plasmide et ainsi produire beaucoup d’ADN. La transcription se termine par un clivage du plasmide par une enzyme de restriction.
Expliquez comment on peut utiliser le phage T7 pour faire des vecteurs d’expression?
Dans ce cas, on veut produire in vivo des protéines en grande quantité, à partir d’un gène cloné correspondant.
On met alors le gène codant pour la polymérase ARN de T7 sous le contrôle d’un promoteur inductible, comme lac. En présence de lactose, la polymérase sera traduite, et pourra aller transcrire également le gène du vecteur sous le contrôle du promoteur T7, avec une séquence de termination T7. Il y a alors régulation de l’expression de protéines, et facilitation de l’expression de protéines toxiques pouvant nuire à la croissance bactérienne.
Expliquez l’évolution in vitro, qui a valu le prix Nobel de Chimie en 2018.
On peut faire évolution une séquence dans un tube à essai.
L’information génétique codant pour un Ac et sa région de fixation à un Ag est introduit dans une collection de phages filamenteux. On sélectionne ensuite les phages qui interagissent avec la molécule d’intérêt. On peut faire plusieurs rondes et introduire des mutations aléatoires pour augmenter l’affinité.
Au bout du compte, utilisation thérapeutiques!
Qu’est ce qu’une maladie virale aigue?
Elle se développe rapidement suite à l’infection, mais se résorbe ensuite, à moins de la mort de l’individu.
Quel type de phage est surtout utilisé pour fabriquer une librairie d’épitope?
Phages filamenteux
