Chapitre 1: introduction Flashcards
Quel est le but de la pathologie dans la pratique médicale?
- élaborer un diagnostic
- préciser le pronostic
- mettre en évidence marqueurs (thérapie)
- évaluer l’effet des thérapies
Quels sont les types de prélèvement?
-cytologies
=> frottis d’un organe
=>par ponction
=> par centrifugation de recueil de liquide cytologique
-prélèvements tissulaires
=> biopsies endoscopiques ou sous repérage radiologique/écho/RMN
=> par analyse des pièces opératoires
=> par autopsie
En quoi consiste la technique d’étalement des cellules sur lames?
- par frottis ou ponction d’un organe
- déposé sur le bord de lame
- étalé par clinicien
- on peut fixer ou non
- coloration
Quels organes peuvent-être ponctionnés?
- ganglions lymphatiques/adénopathies
- thyroïde
- sein
sous repérage échographique
En quoi consiste la technique de centrifugation d’un liquide récolté ou après ponction?
-liquide généralement trop volumineux pour être étalé
=> centrifugation
-placé dans tubes
-matériel centrifugé sur lame (culot-spot) généralement au centre
-coloré
En quoi consiste la cytologie monocouche dite aussi cytologie en couche mince ou cytologie en milieu liquide?
-principe d’aspiration et filtration
-très utilisée dans détection du cancer du col utérin
-après frottis, matériel dans flacon fixateur alcoolique dûment numéroté avec coordonnées patientes
-matériel dispersé, filtré, aspiré et transféré sur lame par automate
-avantage: matériel résiduel restant dans le flacon de fixateur
=> techniques complémentaires (recherche HPV)
Quelle est l’avantage de la cytologie?
- rapide
- peu couteuse
- résultat fiable si interprétée par un pathologiste averti
Pourquoi l’examen cytologique ne fournit que des renseignements partiels voir incertains?
-certaines anomalies cyto-nucléaires ne sont pas spécifiques
=> certaines atypies rencontrées dans l’inflammation peuvent mimer un cancer lors de l’examen cytologique
-ne donne pas d’architecture tissulaire (on ne sait différencier un cancer in situ d’un invasif)
=> examen de dépistage et d’orientation
=> contrôle histologique (biopsie)e presque toujours nécessaire
Quels sont les éléments qui conditionnent la qualité du diagnostic pathologique?
- pièces doivent être dûment identifiées avec renseignements cliniques adéquats
- fixation des pièces opératoires doit être rapide, si possible congelé et stockage dans biobanque
- examen macroscopique
- techniques permettant la réalisation des coupes
- compte rendu doit être précis
En quoi consiste l’encodage?
- chaque pièce arrive avec une feuille de demande avec coordonnées du patient et renseignements cliniques adéquats
- numéro individuel et code barre au labo
- si la pièce est “fraîche”, elle doit arriver le plus rapidement possible
En quoi consiste l’examen microscopique et fixation?
- pièces pesées, mesurées, orientées, leurs marges/berges de résection (limite d’exérèse) sont tatouées à l’encre de chine et découpées (tranchées)
- congelation
- pièce opératoire fixée le plus rapidement possible
- utilisation FORMOL à 10% tamponne à pH neutre ou légèrement alcalin
Quelles sont les règles pour une bonne fixation?
-avant fixation organes creux, ils doivent être ouverts
-organes pleins tranchés en fines tranches de 3 à 10 mm au max
-volume fixateur suffisant (10 fois le volume de la pièce)
-fixation doit être longue (formol fixe au max 1mm d’épaisseur de tissu par heure
=> durée fixation minimale de 2 à 5h
=> 24/48h pour une pièce opératoire
-attention à la sous-fixation et sur-fixation
Pourquoi utiliser de l’encre de chine?
- visualisation des berges d’exérèse
- fournit au chirurgien l’information que l’exérèse de la tumeur est complète ou non
En quoi consiste la déshydratation et la mise en paraffine?
-coupes histologiques classiques sont obtenues à partir de bloc paraffinés
-tissus humains abondants en eau
-déshydratation
=> dans automates par passage des bains d’alcools de gradients (concentration) progressifs (70,95,100%)
-alcool éliminé par xylène(qui dissout aussi les graisses dont adipocytes optiquement vide)
-processus qui prend 6 à 12h
-échantillons sont inclus dans la paraffine à 56°C
Comment se font les coupes et coloration de routine à l’hematoxyline/éosine?
- bloc découpé au microtome
- coupes mesurent 3 à 5 microns
- “ruban” de différents niveaux de coupes
- lame préalablement numérotée et vont être colorées
De quelles natures sont des colorants utilisés?
- aqueux ou alcooliques
- pour dissoudre la paraffine
- réhydrater
Quel est le colorant le plus couramment utilisé?
hématoxyline-éosine
Qu’est-ce que l’hématoxyline?
- couleur bleu/mauve
- colorant basique
- va se fixer sur composants naturellement acide de la cellule (ADN/ARN)
Qu’est-ce que l’éosine?
- couleur rose/rouge
- colorant acide qui va se fixer sur les composants naturellement basique de la cellule et en particulier le cytoplasme qui est naturellement basique
Que colore le safran?
colore collagène en jaune
Comment se fait le processus de déparaffinage?
- réhydratation
- coloration lames
- 1h
- automates de coloration
Citez les techniques morphologiques particulières.
- examen extemporané
- coloration spéciales
- examens immunohistochimiques
- techniques de biologie moléculaire
Qu’est-ce que l’examen extemporané?
- rapide, moins de 30 min
- tissus frais, non fixés
- encodage et examen macroscopique
- congélation dans cryostat à moins 20°C
Quelles sont les limites de l’examen extemporané?
-congélation altère la morphologie
-examen extempo n’est pas aussi fiable qu’un examen effectué dans un processus technique classique
-on n’effectue qu’un ou deux prélèvements d’une lésion tumorale.
=> parfois tumeur volumineuse alors examen tempo ne donne qu’un reflet partiel de la lésion
=>n’est pratiqué que si le diagnostic qu’il apporte est susceptible de modifier le déroulement chirurgical
Dans quelles conditions pratique-t-on l’examen extemporané?
- déterminer la nature bénigne (par exemple une lésion inflammatoire peut mimer cliniquement ou à l’imagerie une tumeur) d’une lésion qui n’a pas pu être effectuée par les techniques classiques
- s’assurer que la lésion enlevée par le chirurgien est bien représentative
- s’assurer que les limites de résection sont saines (pas nécessairement effectuer un prélèvement congelé)
- tissus calcifiés ne peuvent être “techniqués et coupés” en extemporané
Vrai/Faux
Le diagnostic fourni en extempo est un diagnostic de présomption qui doit toujours être confirmé par les techniques classiques par fixation, inclusion et mise en paraffine.
Vrai
Que mettent en évidence les colorations spéciales?
- constituants particuliers de la cellule (mucus, glycogène..)
- composants de la matrice extra-cellulaire (collagène, amyloïde..)
- agents infectieux (champignons, mycobactéries..)
Que colore le PAS?
- glycogène
- champignons
- membrane basale
- mucine (mucus) colorés en rouge
Que colore le bleu Alcian?
Mucines acides colorés en bleu
Que colore le rouge Congo?
Amyloïde colorée en rouge brique
Que colore le Perls?
Fer coloré en bleu
Que colore le Fontana?
- mélanine
- lipofuschine coloré en brun/noir
Que colore le trichrome de Masson?
- collagène coloré en bleu ou vert
- muscle en rouge/brun
Que colore l’Oil Red?
Lipides colorés en rouge
Que colore le Ziehl?
MYCOBACTERES COLOREES EN ROUGE
Que colore Ag de Grocott?
Champignons en noir/argenté
Vrai/faux
L’amyloïdose est biréfringente lorsque l’on examine en lumière polarisée.
Vrai
En quoi consistent les examens immunohistochimiques?
- mettre en évidence diverses protéines
- considérées comme antigènes ATG
- présentes dans les tissus (noyau, cytoplasme ou membrane cytoplasmique)
- à l’aide d’Ac (ATC)
A quoi peut s’appliquer la techniques immunohistochimiques?
- préparations cytologiques
- coupes paraffinées
- coupes effectuées à partir de tissus frais-congelés (certains AG suite à la fixation en effet ne peuvent être détectés)
Qu’est-ce qui est indispensable dans les techniques immunohistochimiques?
-sur tissus fixés, une fixation adéquate est indispensable
-sous-fixation ou sur-fixation (protéines/ATG se recroquevillent)
=> sites antigéniques masqués
=> résultats faussement négatifs
Quelles sont les indications des techniques immunohistochimiques?
- intérêt diagnostique (tumeurs ou protéines virales)
- intérêt pronostique: mise en évidence certains marqueurs indice de prolifération par exemple
- intérêt thérapeutique: cibles thérapeutiques
Expliquez le fonctionnement de la technique d’immunohistochimie.
si on veut mettre en évidence une protéine particulière comme la cytokérltine (CK):
-considérée comme un ATG
-on va la détecter avec un ATC spécifique
=> ATC primaire de souris
-ATC se fixe sur ATG-CK (si CK présente)
-ajout ATC secondaire antisouris couplé à un polymère lié à une peroxydase
=> va se fixer sur ATC primaire
=> réaction oxred qui précipite le polymère
=> chromogène (brun/jaune ou rouge) visible
Quels sont les 4 grands types de marquages immunohistochimiques?
- marquage nucléaire
- marquage cytoplasmique
- marquage membranaire
- marquage mixte membrano-cytoplasmique
Que permettent les techniques de biologie moléculaire?
- mise en évidence de mutations spécifiques
- recherches de clonalité (lymphomes)
- génotypage de certaines tumeurs
En quoi consistent les techniques d’hybridation in situ?
- mise en évidence sur coupe de séquences d’ARN ou ADN
- sondes d’acides nucléiques complémentaires
- couplées à un traceur radioactifs (sonde chaude) ou enzyme (sonde froide) ou fluorochrome (sonde fluorescentes)
- met en évidence séquences virales, délétions ou amplification gènes…
- dénature par la chaleur les 2 brins d’ADN du noyau à l’endroit où on cherche le gène cible
Que doit comporter les résultats d’analyse anatomopathologique?
- écrit et signé
- conclusion synthétique
- donner un diagnostic lésionnel ou hypothèses
- terminologie actualisée et comprise par clinicien
- comporter des éléments de pronostic (surtout en pathologie tumorale)
- tenir compte de la prise en charge pluridisciplinaire du patient
- répondre aux critères d’assurance qualité
