Cellulære immunologiske metoder Flashcards
Hvordan fjernes erytrocytter fra en blodprøve?
Ved at fortynde blodprøven med ammoniocloride buffer.
Hvordan isolerer man mononucleære celler?
Ved centrifugering.
Man udnytter densitetsforskellene ved at tilføje medium (lymphoprep), som har en laver densitet end granulocytter og røde blodceller men højere end mononucleære celler.
Hvad består Lymphoprep af?
Dextran og jern komponenter som natrium metrizoat
Beskriv stepsene i den positive isolations workflow
Antistoffer specifik for cellen tilføres - inkuber.
Dynabeads der har et sekundært antistof coated tilføres - inkuber
Andre celler vaskes væk ved en magnetisk vask
En release reagent tilføres for at fjerne bindingen af dynabeads til cellerne.
Cellerne kan nu isoleres ved en magnetisk vask, hvor dynabeads fjernes.
Hvad er ulempen ved den positive isolations workflow teknik?
Det primære antistof vil stadig sidde på cellerne efter isoleringen.
Beskriv stepsene i den negative isolations workflow
Tilføj antistof mix der binder til alle celler ud over dem man ønsker at isolerer. - inkuber
Tilføj depletion dynabeads - inkuber
Tilføj magnetisk vask således at alle celler der har bundet dynabeads fastholdes.
Overfør de celler som er tilbage til et nyt rør.
Hvad er ulempen ved negative isolations workflow teknik?
Den er meget tidkrævende da man skal kende alle de celler, som er tilstede i ens prøve, så man tilsætter de rigtige antistoffer og for fjernet alle cellerne man ikke er interesseret i
Nævn teknikkerne til at se på proliferationen af celler.
Radioaktivt thymidin
CFSE mærkning
På hvilke celler bruger man thymidin metoden?
Lymfocytter
Hvad binder radioaktivt thymidin til?
DNA
Hvad binder CFSE til?
Intracellulære proteiner, som for hver deling vil dele fluorescencen.
Beskriv kort hvad man bruger ELISPOT til.
Bruges til at undersøge om ens celler producerer et bestemt protein.
Beskriv stepsene i en ELISPOT
I bunden af brønden er der tilsat en proteinbindende membran, som man binder sit antistof til.
Derefter tilsætter man et irrelevant protein, som vil udfylde resten af de proteinbindende steder.
Cellesuspension tilsættes og hvis de producerer det ønskede protein vil det binde til antistoffet.
Herefter tilsætter man et enzymmærket detection antistof. Herved vil en farve vise om proteinet har bundet sig.
Beskriv kort stepsene for den hæmolytiske plaquetest
Man lader cellerne ligge i en plade med en proteinbindende membran. Alt hvad cellen sescenerer vil bindes til bunden af pladen.
Antistofproducerende celler tilsættes herefter, hvor antistoffer vil binde til antigenet bundet på bunden.
Dette kan visualiseres ved at tilsætte et enzymmærket antistof det pågældende antistof.
Hvornår er det favorabelt at bruge knock-out mus?
Hvis man gerne vil vide hvad der sker hvis et molekyle ikke er til stede i musen. Dette kan bruges i sygdomsundersøgelse, hvorved man kan immiterer en sygdom, hvor der mangler eller er en mutation i et gen.
