Aislamiento de proteínas de un proteoma

Question 1

Caracterización de un proteoma

Answer 1

Preparar las muestras puras de sus proteínas, utilizando tecnologías tradicionales y métodos cromatográficos

Question 2

2 técnicas

Answer 2

• Electroforésis bidimensional en geles de poliacrilamida
• Espectrometría de masas

Question 3

Para caracterizar un proteoma

Answer 3

se deben separar las proteínas y determinar su identidad

Question 4

separación de proteínas se hace mediante:

Answer 4

electroforesis bidimensional en gel de poliacramida o 2D-PAGE

Question 5

la separación según la carga es seguida por la…

Answer 5

separación según la masa

Question 6

Detergente SDS del electroforésis en gel

Answer 6

desnaturaliza las proteínas y confiere una carga negativa

Question 7

Las proteínas se separan de acuerdo a

Answer 7

sus masas moleculares

migrando las proteínas más pequeñas más rápido al electrodo positivo

Question 8

la tinción de gel después de la electroforesis revela

Answer 8

un patrón complejo de manchas

cada una con una proteína diferente

Question 9

limitaciones de la electroforésis en gel

Answer 9

1. no todas las proteínas de un proteoma serán visibles
2. problemas de reproducibilidad
3. no es cuantitativa

Question 10

procedimiento de identificación de las proteínas de un proteoma rápido y preciso gracias a:

Answer 10

la esepectrometría de masas y sus avances

Question 11

hay 2 sistemas de ionización

Answer 11

• Mediante desorción por láser (MALDI)
• Por electrospray asistido por radioactividad (ESI)

Question 12

¿Cómo se ven representadas las proteínas diferente en la electroforésis en gel bidimensional?

Answer 12

Un patrón complejo de manchas

Question 13

en vez de identificar la secuencia de aminácidos, las proteínas

Answer 13

… o los fragmentos peptídicos se separan de acuerdo a su relación masa-carga

Question 14

espectrotómetro de masas (3)

Un espectrofómetro de masas consta de 3 unidades:

Answer 14

1. presenta un dispositivo de ionización ( 2 sistemas: MALDI y ESI)
2. cámara de separación (TOF)
3. detector

Question 15

espectrotómetro de masas (3)

(1) ¿Qué hace un dispositivo de ionización?

Answer 15

Transforma fragmentos peptídicos individuales de la fase sólida en una fase gaseosa

Question 16

espectrotómetro de masas (3)

(2) ¿Qué sucede en la cámara de separación?

Answer 16

Los iones se mueven a tráves de un vacío de acuerdo con su carga y masa y se separan sobre la base del tiempo de vuelo (TOF)

Question 17

espectrotómetro de masas (3)

(3) Caracacterísticas del detector

Answer 17

• enorme sensibilidad
• poder de resolución para separar los picos de especies moleculares diferentes

Question 18

V/F

Las proteínas se rompen en fragmentos antes de ser analizados mediante MALDI-TOF

Answer 18

Verdadero

Question 19

enfoque estándar de MALDI-TOF

Answer 19

purificar la proteína de una mancha en un gel y luego dirigirla con una proteasa específica (como tripsina)

hasta 75 aminoácidos de largo

Question 20

Tripsina función

Answer 20

Escinde las proteínas inmediatamente después de residuos de arginina o lisina

Question 21

relación masa-carga permite

Answer 21

determinar la masa molecular

Question 22

corresponde a cada pico observado por espectrometría

Answer 22

un péptido

Question 23

Protocolo para identificar una proteína de interes en gel y espectrometría

Answer 23

• Selección de una mancha
• Digestión con proteasa
• Espectrometría de masas
• Comparación en base de datos

Question 24

V/F

Las identidades proteícas se estiman automáticamente de los perfiles de péptidos obtenidos en la espectrometría

Answer 24

Verdadero

los perfiles se generan in silico

Question 25

V/F

Las proteínas en su mayoría actúan en solitario

Answer 25

Falso

NO actúan en solitario en la célula

Question 26

Una interacción con una 2da proteína bien caracterizada puede

Answer 26

indicar el papel de una proteína desconocida

Question 27

Vinculación del proteoma con la bioquímica celular

Answer 27

Con la construcción de mpas de interacción de proteínas

Question 28

Proteínas polares

Answer 28

serina, treonina y tirosina

Question 29

Proteínas apolares

Answer 29

prolina y leucina

Question 30

Proteínas con carga negativa

Answer 30

Ácido glutámico y ácido aspártico

Question 31

Proteínas con carga positiva

Answer 31

lisina e histidina

Question 32

V/F

En la espectrometría no existen las fuerzas de retardo

Answer 32

Verdadero

Question 33

SDS-PAGE

Answer 33

La viscosidad y el solvente en el gel actúan retardando la migración de los componentes

Question 34

Proteína ALMT1 de trigo

Answer 34

Es un canal de transporte de iones

Está en la membrana plasmática y tiene 6 dominios transmembrana