7.6 Western blot et analyse des resultats experimentaux

Question 1

etapes de la technique SDS-PAGE

Answer 1

1) L’extraction des protéines d’un échantillon.
2) Les protéines sont dénaturées par la chaleur et
par le sodium dodecyl sulfate (SDS). Elles
deviennent linéaires (seulement la structure
primaire qui reste) et chargées (-).
3) Les protéines dénaturées sont déposées sur le
gel. Le courant est appliqué et elles migrent vers
l’électrode (+).
4) La vitesse de migration dépend du poids
moléculaire (taille): plus petites protéines
migrent plus vite.
5) L’ensemble de protéines est séparé, selon leur
taille, en bandes distinctes.
Une bande = une protéine.

Question 2

cest quoi le but d’un western blot?

Answer 2

analyser la presence d’une proteine specifique connue et sa qte

Question 3

etapes d’un western blot

Answer 3

1) Purifier la protéine d’intérêt « Z » (d’un organisme autre qu’un lapin).
2) Injecter « Z » dans un lapin et attendre qu’il produise des anticorps
contre cette protéine.
3) Tuer le lapin et prendre son sérum (plasma du sang avec anticorps).
4) Faire SDS-PAGE sur votre échantillon (dans lequel vous cherchez « Z »).
5) Transférer les protéines du gel sur un filtre (un support plus solide).
6) Ajouter le sérum: les anticorps reconnaîtront la protéine d’intérêt.

• Les anticorps eux-mêmes sont marqués par la radioactivité ou la
  fluorescence ou par les anticorps secondaires marqués.

Question 4

cest quoi des modifications epigenetiques

Answer 4

changements stables et transmissibles causés par

l’activation et la désactivation des gènes, sans altération des séquences de nucléotides

Question 5

cest quoi la proteine CBP

Answer 5

La protéine CBP est une acetyltransférase (HAT) agissant sur la queue de
l’histone H2B. L’ajout de l’acétyl neutralise la charge (+) de l’histone et
facilite le déroulement de l’ADN: la transcription en ARNm est facilitée

Question 6

cest quoi WT?

Answer 6

wild type = ex: souris normale