3.3-CRISPR

Question 1

comment CRISPR est utilisé pour les modifications épigénétiques

Answer 1

couplage de la dCas9 à une histone pour:
-activer la déméthylase
-inactiver la méthyl-transférase et la désacétylase

Question 2

c’est quoi le dCas9 et ces utilités (3)

Answer 2

c’est une protéine cas9 sans activité nucléase qui est utilisée pour la regulation des gènes, livraison du cargo (GFP ou ADN déméthylase) et livraison du cargo à l’aide de l’ARNg

Question 3

c’est quoi le mosaïcisme

Answer 3

développement de plusieurs populations de cellules porteuses de mutations différentes
très variable (15-100%)

Question 4

2 solutions pour éviter les effets off-target

Answer 4

1) préparation des ARNs spécifiques à la cible ayant au moins 3 mésappariements avec les autres séquences de l’ADN du génome
2) réduire la longueur des ARNg à 17-18nt

Question 5

2 outils de CRISPR pour réduire les limitations des off target effects

Answer 5

Cas9 nickases et enhanced eSpCas9

Question 6

2 stratégies pour réduire le mosaïcisme après une édition par CRISPR-Cas9

Answer 6

1) réduire longévité de Cas9 dans l’embryon/cellules cibles
2) cibler l’édition du génome d’un zygote (1 cellule) au lieu d’un embryon plus avancé

Question 7

Comment réduire la longévité de Cas9 dans l’embryon (2 manières)

Answer 7

1) transfection de Cas9/injectionde la protéine au lieu de d’un plasmide codant/ARNm
2) association de Cas9 avec l’ubiquitine pour accélerer sa dégradation par le protéasome

Question 8

c’est quoi les 3 utilités d’avoir la Cas9 nickase combinée avec une cytidine déaminase

Answer 8

1) conversion d’un C-G à un T-A au niveau de l’ADN
2) haute efficacité de mutagénèse
3) mosaïcisme presque inexistant

Question 8

comment cibler l’édition d’un zygote (1 cellule) par CRISPR

Answer 8

micro-injection ou électroporation

Question 9

c’est quoi un exemple de nouvelle génération d’éditeur d’ADN-CRISPR

Answer 9

Cas9 nickase recombinée à une cytidine déaminase