1.5-Production de protéines recombinantes dans systèmes microbiens

Question 1

les 4 grandes étapes pour produire les protéines recombinantes à grande échelle

Answer 1

1)culture et induction
2) séparation des cellules du milieu
3) lyse cellulaire
4) purification de la protéine

Question 2

4 paramètres à contrôler pour la production à grande échelle

Answer 2

1) température
2) pH
3) apport en oxygène
4) vitesse et type d’agitation

Question 3

3 types de fermenteurs

Answer 3

batch, fed batch, continous

Question 4

c’est quoi les 4 phases de croissance des bactéries

Answer 4

1) phase de latence
2) phase exponentielle
3) phase stationnaire
4) phase de mort cellulaire

Question 5

c’est quoi la formule pour le temps de génération (de dedoublement)

Answer 5

t=ln2/u (u=taux de croissance)

Question 6

c’est quoi le fermenteur batch (caractéristiques)

Answer 6

-aucune nouvelle addition de nouveau milieu
-composition du milieu, la concentration microbienne et de protéines cibles changent avec le temps

Question 7

c’est quoi la phase de latence

Answer 7

-synthèse de nouveaux composantes cellulaires et adaptation aux nouvelles conditions
-phase parfois très courte

Question 8

c’est quoi la phase exponentielle

Answer 8

-croissance très rapide (chaque organisme se divise à un moment légèrement différent)
-vitesse de croissance constante
-population presque uniforme

Question 9

c’est quoi la phase stationnaire

Answer 9

-# de microorganismes reste constant (équilibre entre la mort et la division cellulaire)

Question 10

4 raisons pour rentrer dans la phase stationnaire

Answer 10

1) limitation en éléments nutritifs
2) limitation en oxygène
3) accumulation de déchets toxiques
4) population atteint densité critique

Question 11

c’est quoi la phase de mortalité

Answer 11

cellules meurent à un rythme exponentiel

Question 12

c’est quoi le fermenteur “fed batch”

Answer 12

-nouveau milieu est ajouté à différents moments
-allonge la phase exponentielle et stationnaire
-utilisé pour cultures de cellules d’insectes et mammifères
-difficile de mesurer la []

Question 13

risque possible en utilisant le “fed batch”

Answer 13

production d’enzymes protéolytiques (augmentation de la phase exponentielle) qui peuvent dégrader la protéine cible

Question 14

c’est quoi le fermenteur “continous”

Answer 14

-garde # de cellules et volume constant
-ajoute nouveau milieu et sort le vieux milieu

Question 15

risques pour le fermenteur “continous”

Answer 15

-perte de plasmide possible
-beaucoup de milieu utilisé ($$$)
-difficilie de garder la stérilité

Question 16

comment maximiser l’efficacité de la fermentation à l’aide de l’oxygène

Answer 16

ajout continu d’oxygène dans le milieu, éviter les grosses bulles et mesurer l’oxygène dissout avec une sonde

Question 17

comment maximiser l’efficacité de la fermentation à l’aide du pH

Answer 17

garder le pH entre 5.5 et 8.5 en ajoutant un acide ou une base au milieu

Question 18

comment maximiser l’efficacité de la fermentation à l’aide de l’agitation

Answer 18

en agitant, l’oxygène dissout mieux, les nutriments sont distribués et les déchets sont dispersés

Question 19

comment maximiser l’efficacité de la fermentation à l’aide de la température

Answer 19

garder une température constante pour ne pas choquer les cellules, especially pendant l’ajout du milieu

Question 20

3 approches pour diminuer la perte du plasmide

Answer 20

1) insertion d’un gène de resistance à l’antibiotique
2)insertion chromosomique
3) retrait d’un gène chromosomique essentiel et son transfert sur le plasmide

Question 21

3 façon de réduire l’acétate (un produit qui inhibe la croissance)

Answer 21

1) enlever l’acétate par dialyse ou résines d’échanges d’ions
2) introduire un gène qui code pour l’acétolactate synthase
3) cloner le gène pyruvate carboxylase pour rédiriger le flow vers le cycle des acides tricarboxyliques

Question 22

3 façons pour effectuer une lyse cellulaire

Answer 22

1) lyse mécanique
2) lyse enzymatique
3) lyse chimique