3.1-approches de livraison de matériel génétique Flashcards
2 méthodes de transfection
physique ou chimique
4 méthodes chimiques de transfection
1)Coprécipitation
2)Lipofection
3)Utilisation des polycations
4) Fusion de protoplastes
3 méthodes physiques de transfection
1) électroporation
2) biolistique
3)micro-injection
c’est quoi la lipofection/transfection par liposomes
co incubation des liposomes avec l’ADN pour former un complexe Liposome-ADN et ajouter ce complexe aux cellules
C’est quoi l’électroporation
permeabilisation de la membrane de la cellules par un courant électrique pour entrer le plasmide en formant des pores dans la membrane
4 difficultés de la biolistique pour livrer l’ADN nu
1) élimination rapide par la cellule
2)présence de nucléases qui reduisent leur demi-vie
3) absence de spécificité de distribution
4) faible efficacité de capture par les cellules
7 systèmes de transfection spécifiques non-virales
1) électroporation
2) biolistique
3) micro-injection
4) couplage du siARN à un lipide
5)utilisation de bactéries non pathogènes
6) Dendrimères
7) Transposons
4 systèmes de transfection virals
1) Adénovirus
2) rétrovirus
3)Lentivirus
4)AAV
c’est quoi la méthode de couplage d’ARN à un lipide
couplage de l’ARN à une molécule lipidique comme le cholestérol OU dans des nanoparticules de lipoprotéines
que se passe dans la cellule après une transfection d’un complexe ARN-lipide (2 things)
1) la portion sens de l’ARN est dégradée
2) la portion antisens de l’ARN joint au complexe RISC et inactive une ARNm spécifique
c’est quoi la méthode d’utilisation de bactéries non pathogènes pour transfecter(avec ARN)
le shARN est livré dans la bactérie qui sera converti en siARN par le complexe RISC
Les bactéries non pathogènes sont utilisés pour quels organismes comme méthode de transfection
souris in-vivo ou cellules cancereuses
c’est quoi le dendrimères
molécules qui peuvent former des complexes avec l’ADN plasmidique, le shARN, siARN ou les sondes ADN pour effectuer la transfection
c’est quoi la transposase
une enzyme qui peut exciser n’importe quel fragment d’ADN qui est entouré de séquences répétés d’ADN à ses 2 extrémités
3 systèmes utilisés en thérapie génique avec les transposases
1) sleeping beauty
2)Tol2
3)PiggyBac
c’est quoi l’Adénovirus
virus qui ne s’integre pas dans le génome et infecte les cellules latentes et les cellules en division
limites d’ADN exogène qui peut être inseré dans un adénovirus
36Kb
2 limites à l’utilisation de l’adénovirus comme méthode de transfection
1) l’infection est non-spécifique
2) peut causer des réactions auto-immunes fatales
c’est quoi le retrovirus
virus qui infecte+integre seulement les cellules en mitose, non toxique pour les cellules
2 limites pour l’utilisation du rétrovirus comme méthode de transfection
1) cause insertion du matériel génétique aléatoire dans le génome
2) peut causer activation des oncogène et ainsi la leucémie
rétrovirus vs lentivirus
gamma-rétrovirus=infecte et integre seulement des cellules en division
Lentivirus=infecte et integre des cellules latentes, induis rarement une réponse immunologique
c’est quoi la limite de l’ADN exogène inseré dans un AAV
4.5Kb
c’est quoi l’AAV
virus qui est spécifique à certains types cellulaires/tumeurs qui a besoin la présence d’infection par un virus de soutien (herpesvirus/adénovirus)
